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文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！ 高效液相色谱的维护和保养 色谱泵保养 流动相要过滤 常见缓冲液时, 停泵前要用水冲洗, 并用水冲洗柱塞杆清洗孔 拧紧排液阀时, 不要太用力, 以不渗液为准 更换流动相时, 要确保两种溶剂互溶性,如不互溶, 要用一个中间溶剂过渡. 比如:使用无机盐缓冲液时,用前和用后均须用水过渡 流动相脱气 流动相脱气目 使色谱泵输液正确 输液均匀正确, 而且脉动减小 保留时间及色谱峰面积重现性提升 提升检测性能 预防气泡引发尖峰 基线稳定, 信噪比增加 溶剂紫外吸收本底降低 保护色谱柱 降低死体积 预防填料氧化 流动相脱气方法 加热 简单, 如同抽真空一起使用, 其效果很好。但轻易造成流动相组成改变 抽真空 同上, 通常在溶剂抽滤同时, 也有脱气效果 超声波 简单, 但效果不理想。 通惰性气体（通常见氦气） 可保持连续脱气, 多用于低压梯度 在线脱气机 可保持连续脱气, 多用于低压梯度 色谱泵排气操作 使用前, 应先确定泵头内没有气体, 如有气体要按以下步骤排气: 将排液阀反时针转2-3圈, 用10ml注射器抽, 直到出液 按以下方法之一将泵后面放空 将U6KC阀打开, 或717设在PURGE状态 或, 将参比阀打开 或, 把色谱柱摘下 打开电源开关 开大流速到 6~9ml/min 同时用10ml注射器从排液阀注入流动相 直到泵后流速稳定无气泡为止 色谱泵运行 注意用外部控制器与用泵面板控制区分 有些型号外部控制器与面板不能同时用 如需要面板控制, 需要断开控制线或关闭控制器 排气后色谱泵即可运行 注意∶ 排气后, 先设流速为 0 恢复排气时断开部分, 如∶进样器、色谱柱 如需要, 恢复排气时断开控制线 依据色谱柱不一样, 逐步提升流速到设定值 液相色谱对流动相要求 除色谱柱对流动相要求外, 还有∶ 与检测器匹配 脱气 避免卤素离子（不锈钢系统） 溶剂粘度 预防细菌生长 流动相保留 有机溶剂流动相: 室温下密封,避光保留 缓冲盐流动相: 当日现配现用 低温下密封保留,通常不超出3天 预防长菌 有机溶剂与水（缓冲盐）混配流动相: 低温密封保留 预防有机相挥发 选择适宜容器 2 星期 1 天 1 星期 1 小时 新鲜配制 5 10 15 20 25 0 分 保留于聚乙烯瓶中超纯水 测试条件 水样: 40ml trace enrichment @ 2.0 ml/min 色谱柱: C18 反相柱 (Waters) 梯度: 线性 100% 水－ 100% 乙腈 波长: 254 nm 1 天 1星期 新鲜配制 5 10 15 20 25 0 分 保留于标准棕色玻璃瓶中超纯水 测试条件 水样: 40ml trace enrichment @ 2.0 ml/min 色谱柱: C18 反相柱 (Waters) 梯度: 线性 100% 水－ 100% 乙腈 波长: 254 nm 检测器保养 如长时间不用检测器能够关掉紫外灯 在4小时以上不用时, 太频繁开关也不好 不要让缓冲液长久停滞在检测池内 用纯水冲洗 示差检测器及荧光检测器 注意流动池耐压, 不要在后面加压 相关自动进样器针清洗 Purge Injector 与 Needle Wash 洗针溶剂瓶(绿色塑料管)不要放在717plus上部, 应放于717plus同一水平面 洗针溶剂依据流动相不一样应有不一样: 异丙醇？ 液相色谱系统清洗与钝化 通常采取30％磷酸作为清洗剂, 用6M硝酸作为钝化剂, 先清洗再钝化 清洗目是去除不锈钢管路及系统内污垢 钝化目是使不锈钢管路内表面形成光滑均匀氧化膜 高效液相色谱维护与保养 色谱柱使用及保养 测柱效 – 良好色谱试验习惯 拿到一根新色谱柱时, 先测柱效 保留在新色谱柱上测得色谱图, 并统计色谱测试条件 定时检测柱效 定时检测仪器谱带展宽 测柱效方法 色谱柱种类繁多,性能各异,测定方法亦各不相同 Waters色谱柱均附有Use and Care说明书,可按说明书所述方法测定 以下是Waters反相C18柱测定方法: 流动相:乙腈/水=60:40;流速:1ml/min 样品:50mg Acenaphthene(二氢苊)溶于100ml乙腈,加入600μl丙酮 进样量5μl 检测波长:254nm 计算色谱柱柱效 N 理论塔板数计算公式: W s 方法 Wtan 16 切线法 Wh 5.54 半峰高 W3s 9 3s W4s 16 4s W5s 25 5s 色谱柱正确使用及操作 流动相转换 尤其是GPC柱 流速(压力)改变幅度: 0.1ml/min 凝胶柱（GPC及糖柱） 温度改变幅度 专用色谱