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生理实验设计 生理实验设计 PAGE 生理实验设计 实验设计：激素对血糖浓度的影响 ——以家兔为例的实验设计 实验目的： 学习对家兔采血和注射方法，了解血糖浓度测定方法，验证激素对血糖浓度的调节。 实验原理： 对血糖产生影响的激素有很多，其中使血糖浓度降低的激素为胰岛素; 使血糖浓度升高的激素有胰高血糖素、肾上腺素、肾上腺皮质激素、生长素、甲状腺素。它们对血糖的调节主要是通过对糖代谢各主要途径的影响来实现的。 本实验将家兔作为实验对象，对其进行空腹采血后分别注射各激素，作用一段时间后再分别采血，同时观察注射激素前后的家兔血糖浓度的变化，以验证激素的调节作用。 萄糖氧化酶（GOD）将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢，后者在过氧化物酶（POD）和色素原性氧受体存在下，将过氧化氢分解为水和氧，同时使色素原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，其色泽深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比。其反应式如下： 葡萄糖 + O2（GOD）—→ 葡萄糖酸 + H2O2 实验对象： 家兔 实验试剂： 胰岛素注射液（40单位/ml）、胰高血糖素注射液、肾上腺素注射液（1︰1000）、生理盐水、肝素抗凝剂（配成2500单位/ml）、凡士林、二甲苯、葡萄糖标准应用液（L）、L磷酸盐缓冲液 、酶试剂、 酚溶液、酶酚混合试剂、 12mmol/L苯甲酸溶液、100mmol/L葡萄糖标准贮存液　　 实验器材： 适量规格注射器、台式磅秤、兔手术台、刀片、干棉球、纱布、试管、试管架、沸水浴 实验操作： 动物准备及空腹采血 取试管8支，编号1-8，分别加入肝素抗凝剂 ml。取空腹16小时以上的正常家兔四只，分别编号a、b、c、d，称体重（一般是2-3kg）并记录。 用耳静脉采血法：先拔去兔耳缘静脉处的毛，再用二甲苯擦拭兔耳部静脉，使其充血，在其周围抹上凡士林(防止污染、润滑），用刀片轻轻挑破边缘耳静脉，放血入含抗凝剂的试管1～4，约需2-3ml，边滴边摇，以防凝固。取血完毕，用干棉球压迫血管止血 2．注射激素并再采血 注射液 生理盐水 胰岛素 胰高血糖素 肾上腺素 取血时间 a kg —— —— —— 30min b —— 4单位/kg —— —— 1h c —— —— kg —— 30min d —— —— —— kg 30min 皮下注射，观察兔子情况。经各自取血时间后，心脏取血入抗凝管5-8中。采血方法同上。 3.测定注射前后的血糖 取8支干燥试管，编号。将收集的8管血液用离心机离心10分钟(每分钟2500转)，取上层血浆，分别制成1-8共8管标本。用葡萄糖氧化酶法测血糖，混匀，置37℃水浴中，保温15min，在波长505nm处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度。空腹血清葡萄糖为～L 。取血后立即腹腔或皮下注射25%葡萄糖液10ml，以免家兔发生胰岛素性休克而死亡。 血液葡萄糖mmol/L= 测定管吸光度 ／标准管吸光度 × 注意事项： 1.离心机的使用 ⑴.离心前一定要配平（位置配平和重量配平）。 ⑵.使用时离心机的盖子一定要盖紧，以免发生意外。 ⑶.要等离心机完全静止后才能打开盖子。 2.血清或血浆应在采血后及时与细胞分离，以避免血清或血浆中葡萄糖被细胞利用而降低。 3.血糖测定应在取血后2h内完成，血液放置过久，糖易氧化分解，致使含量降低。 临床意义： 1.血糖升高：病理性主要见于糖尿病，其他内分泌疾病如肾上腺皮质机能亢进，垂体前叶机能亢进等。 2.血糖降低：病理性如胰岛细胞瘤、胰岛素分泌过多，过量胰岛素治疗，肾上腺皮质功能减退等。 问题讨论： 实验对象为什么选择家兔取四只的理由是什么 对家兔取血为什么选择耳缘静脉？ 加不同的激素之后取血的时间为什么不一样？ 三种激素的作用机理分别是什么？ 除了实验设计的三种激素，还有哪些激素可以有相关作用？ 实验报告 预期实验结果： 用药前家兔的血糖浓度作为参照； b组家兔血糖浓度明显降低至低与参照浓度；c,d组家兔血糖浓度明显升高至高于参照浓度；a组家兔血糖浓度略微下降。A中加入生理盐水与BCD形成空白对照，加入生理盐水与无生理盐水区别是减少误差。 在动物体内，多种激素参与对血糖浓度的调节。 本实验中，胰岛素会使血糖浓度降低，家兔出现相应的低血糖症状，可能有虚弱、发抖、激动、震颤、心跳加速、抽筋、情绪激动、恐惧、惊厥、抽搐、嗜睡（甚至昏迷死亡）；肾上腺素、胰高血糖素使血糖升高，出现相应的高血糖症状，可能有尿量增多， 恶心，呕吐，虚弱无力，心跳快速，呼吸缓而深。 实验分析： 神经系统对血糖浓度的调