动物微生物及免疫学实验的报告.docVIP

动物微生物及免疫学实验的报告 动物微生物及免疫学实验的报告 PAGE / NUMPAGES 动物微生物及免疫学实验的报告 动物微生物及免疫学实验的报告 掌握一般培养基的制备原理及要求，掌握培养基酸碱度的测定，熟悉一 般培养基的制备过程和各种器皿灭菌方法。 掌握细菌分离培养的基本要领和方法，掌握细菌抹片的制备方法和革兰 氏染色法及油镜的使用方法，并认识革兰氏染色的反应特性。 掌握学习用微生物学原理诊断疾病的一般方法及步骤。 器材 量筒、烧杯、电子天平、漏斗、三角烧瓶、空试剂瓶、 玻璃棒、玻璃平皿、刻度吸管、 pH 试纸、纱布、脱脂棉、天 平、电炉、试剂瓶瓶塞、扎绳、放大镜、包装纸、洗耳球、 酒精灯、载玻片、火柴、吸水纸、剪刀、记号笔、接种环、注射器、镊子、钳子、毫米尺、培养箱、水浴培养箱、高压蒸汽灭菌锅、油镜 试剂及材料 肘胨、蛋白胨、猪胆盐、氯化钠、琼脂、乳糖、 %结晶紫水溶液、 %中性红水溶液、血清、胰化蛋白胨、酵母提取 物、氢氧化钠、盐酸、牛血清、革兰氏染色液、蒸馏水、小白鼠、病猪内脏 培养基的制备 1、麦康凯培养基 组成：蛋白胨 17g、肘胨 3g、猪胆盐 5g、氯化钠 5g、 琼脂 17g、乳糖 10g、 %结晶紫水溶液 10ml、 %中性红水溶液 5ml、蒸馏 水 1000ml 方法：将蛋白胨、肘胨、猪胆盐和氯化钠溶解于 400ml 蒸馏水中，调节 pH 至。将琼脂加入 600ml 蒸馏水中，并加入乳糖，加热 熔化。将两 液混合， 分装于烧瓶内， 用纱布、 扎绳等捆好后， 121℃ 高压灭菌 15~30min 。待冷却至 50~ 55℃时，加入结晶紫和中性红 水溶液，摇匀后 倾注平板。 注：结晶紫和中性红水溶液配好后需经高压灭菌。 2、血清平板 组成：营养琼脂、牛血清 方法：将灭菌的营养琼脂加热熔化， 冷却至 45~50℃时， 加入牛血清，并 混匀，倾注平板。 注：不得将牛血清一并加入后再灭菌。 3、LB 培养基 组成：胰化蛋白胨 10g、酵母提取物 5g、氯化钠 10g、 琼脂 15g 方法：在 950ml 蒸馏水中加入胰化蛋白胨、 酵母提取物、 琼脂和氯化钠， 调节 pH 至，加热熔化，分装于瓶中，用纱布、扎绳等 捆好后， 121℃高压灭菌 15~30min 。待冷却至 50~ 55 ℃时， 倾注平板。 4、液体培养基 病料取材 在病猪死亡后，首先用显微镜检查其末梢血液膜片中是 否有炭疽杆菌存在，未发现，则立即用消毒的器械对其进行 生理解剖， 观察其病理特征现象， 取出病猪的十二指肠、 胃、 肝脏三处的组织物，并注意组织的完整性，用储物袋密封保 存。 细菌粗培养 1、消毒灭菌：操作人员先用消毒水清洗手或戴好实验 手套，再用消毒水对无菌操作台内桌面及用酒精灯外焰对待 用器械进行火焰灭菌。 2、接种 在无菌操作台酒精灯旁打开用储物袋密封保存的病料， 先左手持镊子右 手持剪刀，把病料剪出一个小口。 右手持灭过菌的接种环，左手持平板，并用拇指、食指 及中指将平皿揭 开约 20 左右，然后将接种环前端插入小口旋转一下后， 再用划线接种的方法接种到一个血清平板上。 用记号笔在平板底部作好日期、 操作人员、 部位等标记， 并将平板倒放。 以此方法，分别接种十二指肠、胃粘膜、肝脏于血清平 板上，各接种 2 个血清平板。 3、培养：将接种好的血清平板倒扣放入 37℃培养箱中， 反向培养 24 小时。 注：划线接种时尽量划开，以保证长出 单个菌落，且划线时接种环应尽量倾斜，以免划破培养基； 待接种完毕后熄灭无菌操作台内酒精灯，关闭好无菌操作台 窗口，打开无菌操作台内的紫外灯。 。 细菌纯培养 1、菌落特征判断 待粗培养的细菌培养 24 小时后，取出用放大镜观察记 录单个小菌落的形态特征并用实验报告纸记录好，并在平板 底部上做好观察标记，其形态特征包括大小、形状、菌落边 缘、表面构造、隆起度、湿润度、透明度、颜色等。 2、取单个菌落进行革兰氏染色镜检 取干净的载玻片，用记号笔在其一面做好正反面标记， 再在载玻片另一 面中央滴上一小滴蒸馏水。 将接种环在火焰上灭菌，待冷却后，在酒精灯旁从标记 的单个小菌落中 取少许细菌置于蒸馏水中混匀，用接种环涂成直径约的菌膜，再在酒精灯火焰上方以钟摆速度通过固定好细菌，待冷却进行染色。 先滴加草酸结晶紫溶液染色 1~2min，再水洗； 然后滴加 革兰氏碘液溶液 染色 1~2min，再水洗；随后滴加 95%的酒精脱色 30~60s， 再水洗；最后滴加稀释的品红进行复染 30~60s，再水洗；待 干燥或吸水纸吸干后镜检。 将干燥的载玻片放在 1000 倍油镜下，滴加一滴松柏油 进行镜检，观察其 形态特征，判断细菌的种属。 3、细菌接种培养 消毒灭菌：操作人员先用消毒水清洗手或戴好实验手 套，再用消