LC—MS测定鳗鱼中氯霉素残留量 .docxVIP

PAGE PAGE 1 LC—MS测定鳗鱼中氯霉素残留量 二、试验原理 样品中氯霉素以乙酸乙酯提取，提取液经浓缩后，以水溶解，Oasis HLB固相萃取柱净化，然后以LC—MS仪测定，按照保留时光定性，外标法定量。三、仪器与试材1．仪器与器材液相色谱一串联四级杆质谱仪(配有电喷雾离子源)、液体混匀器、固相萃取真空装置、自动浓缩仪、氮气吹干仪、振荡器、组织匀浆器、离心机等。2．试剂除特殊解释外，试验中所用试剂均为分析纯，水为去离子水或蒸馏水。(1)常规试剂与溶液：乙酸乙酯、甲醇、乙腈、乙腈一水溶液(1+7、1+4，体积比)。(2)Oasis HLB固相萃取柱(60mg，3mL)：用法前分离用3mL甲醇和5mL水预处理，保持柱体潮湿。(3)氯霉素标准储备溶液(0.1mg／mL)：称取适量的氯霉素标准物质(纯度≥99％)，以甲醇配制，于4℃储存，可用法两个月。(4)氯霉素标准工作溶液：用空白样品提取液将氯霉素标准储备溶液分离配成氯霉素浓度为0.5ng／mL、1.0ng／mL、5.0ng／mL、10ng／mL、50ng／mL和100ng／mL的标准工作溶液，于4℃保存，可用法l周。3．试验材料2～3种鳗鱼，各250g。四、试验步骤1．样品提取(1)将100g鳗鱼样品去皮、去骨，切碎后匀浆，置于—20℃保存。(2)取5.00g匀浆样品于50mL聚丙烯具塞离心管中，加入5mL水，于液体混匀器上迅速混合lmin。精确?????加入15mL乙酸乙酯，在振荡器上振荡10min后，以3000r／min离心5min，吸取上层乙酸乙酯12mL转入自动浓缩仪的蒸发管中，用自动浓缩仪在55℃减压蒸干后，以5mL水溶解残渣，用于净化。2．样品净化(1)样品提取液以小于等于3mL／min的流速通过Oasis HLB固相萃取柱，待溶液彻低流出后，用10mL水分两次洗蒸发管和储液器并过柱，再用5mL乙腈一水溶液(1+7，体积比)洗柱，弃去所有淋出液，在65kPa的负压下减压抽干5min。(2)以5mL乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液于10mL刻度离心管中。于50℃用氮气吹干仪吹干，用乙腈一水溶液(1+4，体积比)定容至0．8mL，供液相色谱一串联质谱仪测定用。3．测定(1)将氯霉素标准溶液在LC-MS联用仪上分析，以溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。(2)同时，对样品净化液举行分析，并按照标准曲线查出样品净化液中氯霉素残留的浓度。(3)参考色谱条件：色谱柱为PinnacleⅡC18柱(150mm×2.1mm，5μm)；流淌相为乙腈水溶液(1+4，体积比)，流速为0．2mL／min；柱温为30℃；进样量为40μL。(4)参考质谱条件：电喷雾离子源；负离子扫描；多反应监测；电喷雾电压为4500V；雾化气压力为0.069MPa；气帘气压力为0.069MPa；辅助气流速为6L／min；离子源温度为450℃；去簇电压为、55V。(5)平行实验和空白实验(除不称取试样外，均按上述步骤举行)。4．计算按下式计算样品中氯霉素的残留量：x=cV/m式中，x为样品中氯霉素的残留量，μg／kg；c为样品净化液中氯霉素的浓度，ng／mL．；V为样品净化液的定容体积，mL；m为净化液代表样品的质量，g。五、注重事项1．计算结果应扣除空白值。2．在用标准曲线对样品举行定量时，样品溶液中氯霉素的响应值均应在仪器测定的线性范围内，否则应对样品溶液举行稀释或浓缩。3．试验步骤中的色谱与质谱条件仅供参考，实际分析过程中应按照仪器的型号和试验条件，依据解释书，通过准备试验举行调节。4．在本试验的参考色谱条件下，氯霉素的保留时光为12.31min。六、思量题1．简述采纳HPLC与LC—MS测定抗生素的异同。2．简述质谱分析中定性离子对和定量离子对的含义，并解释它们是如何产生的。上一篇：下一篇：