氨基糖苷类药残留测定方法（一） .docxVIP

PAGE PAGE 1 氨基糖苷类药残留测定方法（一） 3.1.4.2测定办法 目前AGs残留检测常用的测定办法主要有免疫分析法、微生物法和仪器分析法等。(1)免疫分析法(immunoassay)免疫分析法适用于复杂基质中痕量组分的分别和检测，是以抗原、抗体的特异性结合和可逆性反应为基础的分析技术，具有较高的挑选性和敏捷度。AGs的免疫分析主要有酶联免疫吸附法、免疫胶体金技术、发射免疫法和免疫传感器等。1)酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay， ELISA)ELISA是将可溶性的抗原或抗体结合到等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性举行免疫反应的定性和定量检测办法。因为酶的催化效率很高，可极大地放大反应效果，从而使测定办法达到很高的敏感度。Loomans等以新霉胺为半抗原，通过碳二亚胺(EDC)偶联到预活化的载体蛋白(钥孔虫戚血蓝蛋白)上，免疫兔子，获得对、和新霉素特异性吸附的多克隆抗体，以此建立了牛奶中庆大霉素、卡那霉素和新霉素残留的竞争性ELISA检测办法。在原料奶(无样品预处理)中，庆大霉素、卡那霉素和新霉素的50%抑制水平(IC50)分离为9ng/mL、21ng/mL和113ng/mL。王忠斌等报道了AGs多残留的ELISA分析办法。以新霉素的降解产物新霉胺为半抗原，采纳戊二醛合成新霉胺免疫原，制备出针对多种AGs的多克隆抗体，并用法高碘酸盐法制备新霉胺的酶标抗原，建立AGs的cdELISA办法。该办法对新霉素、庆大霉素和卡那霉素的检测限分离为0.2mg/kg、0.15mg/kg和0.35mg/kg，满足AGs多残留免疫检测的要求。Solomun等建立了一种能迅速、敏捷地定性筛查动物源食品(肉类、肝脏、肾脏、蛋、奶)中新霉素的ELISA办法，并根据欧盟要求举行了办法验证。该办法的LOD为5.7ug/kg(肾脏)～29.3ug/kg(牛奶)，LOQ为11.4ug/kg(肾)～59.7ug/kg(鸡蛋)；添加回收范围为65.8%～122.8%，CV为5.9%～28.6%。Chen等建立了猪组织中庆大霉素的ELISA检测办法。用庆大霉素-小牛血清蛋白(BSA)偶联物免疫兔子，15次免疫后收集抗血清。优化免疫试剂浓度，间接竞争ELISA(ciELISA)的IC50为0.98ng/mL，挺直竞争ELISA(cdELISA)的IC50为0.92ng/mL。通过优化其他参数，cdELISA与其他AGs不发生交错反应，可以在45min内完成。在25～200ug/kg添加浓度范围，该cdELISA办法的回收率在64.7%～101.2%之间，CV在4.5%～12.1%之间；肌肉中的LOD为6.2g/kg，肝脏为3.6ug/kg，肾脏为2.7ug/kg。Jin等利用单克隆抗体，建立了动物血浆和奶中庆大霉素的cdELISA分析办法。该单抗与其他AGs没有交错反应。办法LOD分离为0.9ng/mL(PBS)、1.0ng/mL(血浆)和0.5ng/mL(奶)；在25～100ng/mL添加范围，回收率在85%～112%之间。Jin等制备了卡那霉素的单克隆抗体IgG1，该单抗对卡那霉素有高度特异性，以此建立了动物血浆和乳汁中卡那霉素的cdELISA检测办法。该办法在PBS中的LOD为1.1ng/mL，血浆中为1.4ng/mL，乳汁中为1.0ng/mL。张桂贤将链霉素与BSA和卵清蛋白(OVA)偶联，免疫BALB/C小鼠，筛选出能稳定分泌单抗的IgG2b型单抗细胞株。注入小鼠腹腔，制备腹水，获得效价为1：51200的单克隆抗体，并建立ciELISA办法。经优化后，该办法在1～10000ng/mL之间线性关系良好，相关系数为0.9726，IC50为33.03ng/mL，LOD为1.0ng/mL。交错反应试验表白，与交错率达127%，与庆大霉素卡那霉素、新霉素无交错反应。应用于牛奶和鸡肉中的链霉素分析，牛奶中的回收率在68.8%～78.1%之间，鸡肉中的回收率在54.7%～61.2%之间。范国英等研制出迅速检测奶中链霉素残留的阻断ELISA试剂盒，用方阵滴定法确定阻断ELISA试剂盒中mAb和GaMlgG HRP的工作浓度，敏捷度为0.37ug/L，具有较高的回收率和精确?????度，与双氢链霉素的交错反应为115%，与其他抗菌药物交错率小于0.001%。Tanaka等建立了ciELISA法测定鸡的血浆中大观霉素。以大观霉素-BSA偶联物作为免疫原，免疫兔子，获得多克隆抗体，对双氢大观霉素和四氢大观霉素的交错反应率分离为44.0%和13.8%，而对其他抗生素没有交错反应。该办法的LOD为2ng/mL，平均回收率达到97%～110%。Burkin等以多种偶联方式制备安普