氨基糖苷类药残留分析技术（一） .docxVIP

PAGE PAGE 1 氨基糖苷类药残留分析技术（一） 3.1.4.1 前处理办法目前，AGs残留检测涉及的主要基质有蜂蜜、牛奶，以及肝脏、肾脏、肌肉等动物组织。这些基质往往含有较多蛋白质和，使AGs易与和脂类等混杂在一起，导致色谱柱污染。样品的预处理是为了除去混杂物以免污染色谱柱和干扰AGs的分别分析。样品前处理主要包括提取、净化和浓缩等步骤。(1)提取办法生物样品中AGs难以用非极性有机溶剂提取，常用水溶液和极性溶剂提取，采纳的提取办法主要有液液萃取法(LLE)、加速溶剂萃取法(ASE)和基质固相簇拥法(MSPD)等。1)液液萃取(liquid liquid extraction, LLE)AGs具有水溶性，可以用、水等极性溶剂挺直提取。同时，在提取时还可加入、、等溶液沉淀蛋白质，将生物样品与酸溶液混匀或一起均质。Kowalski等用毛细管电泳法(CE)检测蛋黄中的链霉素，采纳乙腈作提取溶剂，同时沉淀蛋白质，回收率可达71.8%。Kumar等建立了检测动物肾脏和蜂蜜中10种AGs的测定办法。肾脏用水溶液提取,蜂蜜用水溶解,经弱阳离子交换柱固相萃取净化后,液相色谱-三重四极杆质谱(LC-MS/MS)检测。蜂蜜和肾脏中的定量限(LOQ)分离为2～125ug/kg和25～264ug/kg,日间相对标准偏差(RSD)分离为6%～26%和2%～21%。Tao等应用LC-MS/MS建立了同时测定肌肉、肝脏(猪、鸡和牛)、肾脏(猪和牛)、牛奶和鸡蛋中15种AGs的全自动分析办法。匀浆后的样品用缓冲液(含乙二胺四乙酸)萃取，用羧酸柱举行自动固相萃取净化，LC-MS/MS测定。10种AGs的检测限(CCa)和检测能力(CCβ)值范围分离为8.1～11.8ug/kg和16.4～21.8ug/kg；办法回收率范围为71%～108%。Vinas等在检测蜂蜜、牛奶、鸡蛋和肝脏中链霉素和双氢链霉素时，用0.5 mol/L高氯酸溶液水解，释放蛋白结合态的分析物，并沉淀蛋白质，上清液用饱和氢氧化钠溶液调至中性后，进高效液相色谱(HPLC)检测，回收率良好，链霉素的检出限(LOD)为7.5μg/kg，双氢链霉素为15ug/kg。Almeida等建立了测定家禽、猪、马和牛肾脏中10种AGs残留的分析办法。用法含有三氟乙酸的磷酸盐缓冲液提取后，举行中和，再用阳离子交换柱净化，LC-MS/MS测定。办法CCa和CCβ分离为1036～12293ug/kg和1073～14588ug/kg；LOQ为27～688ugkg；家禽肾脏中全部待测物的回收率大于90%，RSD小于15%。孙雷等采纳10mmol/L KH2PO4溶液(含0.4mmol/L EDTA和2%三氯乙酸)涡旋振荡提取动物组织中的8种AGs，调整pH7.5～8.0后，再用CBX固相萃取柱净化，UPLC-MS/MS测定。8种AGs的LOD为5ug/kg；LOQ为10ug/kg；办法平均回收率为83.0%～114.1%，批内RSD为1.1%～11.4%，批间RSD为2.1%～8.9%。2)加速溶剂萃取(accelerated solvent extraction,ASE)加速溶剂萃取是在提高的温度(50～200℃)和压力(1000～3000psi或10.3～20.6MPa)下用溶剂萃取固体或半固体样品的新颖样品前处理办法。Ding等报道了定量测定生物样品中林可霉素的分析办法。样品先冻干，碾磨成粉，再用ASE提取。试验发觉，用乙腈-水(7+3，v/v)在100℃、100bar提取15min，循环3次，效果最佳。再经固相萃取柱净化后，LC-MS/MS测定，办法回收率在77%～88%之间。Yuan等开发采纳ASE提取动物源食品中林可霉素和大观霉素等残留分析办法。采纳磷酸盐缓冲液提取，三氯乙酸沉淀蛋白，再用C18固相萃取柱净化，经衍生化后，用气相色谱(GC)和蔼相色谱-质谱(GC-MS)测定。