RACKs、PKC及其相关蛋白间的相互作用 .docxVIP

PAGE PAGE 1 RACKs、PKC及其相关蛋白间的相互作用 磷脂酶C：讨论发觉，cPKCβII中RACKI的结合位点在C2结构域内，而磷脂酶C (PLCγ）序列中亦含有C2结构域，因此，判断RACKl与PLCγ之间也存在互相作用。PLCγ是在细胞受到生长因子刺激后，促进DAG和IP3生成的一种信号酶。试验发觉，当细胞受到表皮生长因子（EGF)刺激后，PLCγ与RACK1之间的结合水平上升；同时，在体外激活EGF受体可使PLCγ中的酪氨酸残基磷酸化，增强PLCγ的活性，并促进其与RACK1的结合。在此基础上，RACK1可使cPKCβ II定位于活化的PLCγ周围，而PLCγ催化生成的DAG又是PKC的活化因子，为EGF引导的PKC信号通路的激活提供了一种有效的方式。 Ras : Ras是原癌基因ras的表达产物，作为小G蛋白家族的一员，是参加细胞生长调整的关键性蛋白。Ras活化需要将结合的GDP转为GTP，而GTP酶活化蛋白（GAP）可催化这种反应。讨论发觉，GAP也含有与PKC和PLCγ类似的C2结构域，即GAP同样可与RACK1结合。但不同的是，在Ca2十的作用下，缺少C2结构域（突变结果）的GAP可与RACK1结合，提醒GAP中还存在其他可与RACK1发生作用的结构域。Cartwright等（1998)通过体外试验讨论发觉，GAP含有SH2结构域，其中12个SH2结构域中的1/3可与RACKI结合。因此认为GAP与RACKS的结合可能由多个结构域来介导，其中包括SH2或C2结构域。同时还发觉，GAP和PLCγ都含有PH结构域，它可参加蛋白质分子偶尔蛋白质与脂类间的互相作用。Touhara等（1994）发觉，G蛋白中的β亚单位与RACKl是同源类似物，7个重复的WD40结构域可结合含有PH结构域的信号酶。进一步的讨论发觉，GAP、发动蛋白-1(dynwnin-1)和血影蛋白（spectrin )等分子内均含有PH结构域，且与RACKl高度亲合，而缺失了PH结构域的GAP突变体则不能与RACKl结合；此外，人们发觉，在 GAP分子内临近PH结构域的部位存在PKC的磷酸化位点，当PKCs使其磷酸化后，则磷酸化的GAP与RACK1的亲和力显然下降。因此，提醒PKC、GAP和RACK1之间可以形成复合体，使PKC的底物GAP临近cPKCβ II；同时，PKC可通过GAP对Ras的调整，来间接调整Ras的活性。发动蛋白-1：发动蛋白-1是一种与网格蛋白有被小泡的微囊循环相关的蛋白，具有GTP酶活性，其序列中的PH结构域内有PKC的作用位点，且可与RACKI结合。讨论发觉，活化后的cPKCβ II可与RACKl和发动蛋白形成复合物，同时RACK1可使发动蛋白-1的GTP酶活性增强6倍，且提高了cPKCβ II对发动蛋白的磷酸化水平。提醒RACK1不仅作为接合体蛋白促进PKC与底物发动蛋白-1的结合，且挺直调控发动蛋白-1的酶活性。Src和PTPμ; Src是原癌基因src的表达产物，具有酪氨酸激酶活性，且可调整细胞生长和分化。在乳腺癌和结肠癌等多种肿瘤细胞中，均可发觉Src活化形式的存在，且对赘生物表型的维持具有重要作用。在3T3细胞内发觉，PKC与Src之间存在互相作用，应用PMA激活PKC可提高Src的活化水平。Cartwright等（1998）讨论发觉，PKC对Src调整的分子结构基础是Src的SH2结构域可与RACKl结合；若将RACK1中的第6个WD40结构域中的酪氨酸残基磷酸化，可增加两者间的结合；完整的Src可与RACK1免疫共沉淀，且在PMA活化的3T3细胞中，可发觉两者分布于同一区域。体外讨论还发觉，RACKI同Src的结合使后者的酶活性下降50%，因此，若RACKl过表达，则酪氨酸残基的磷酸化程度和细胞的增殖反应都将削弱。虽然在体外Src与RACK1的结合不需要PKC的参加，但在体内PKC的活化可增加Src与RACK1之间的互相作用，提醒RACKl可将酪氨酸激酶途径与丝氨酸／苏氨酸激酶途径联系起来。酵母双杂交筛选试验发觉，蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPμ）也可同RACKl互相作用。PTPμ在昆虫细胞内过度表达时，可与PKC发生互相作用；若有活化的Src存在可影响PTPμ同RACKl的互相作用，提醒PTPμ与Src之间存在竞争性抑制。同样讨论发觉，在高密度培养的肺上皮细胞中，内源性RACKl与PTPμ的结合能力增加，尤其在细胞间互相接触的部位，表白PTPR可将RACK1聚拢到特定的部位，并调整正常细胞之间的戮附。因此，若应用Src抑制PTPμ与RACKl之间的结合，可通过干扰细胞之间的互相作用来促进表型的转变。整合素：整合素（integrin )中β亚单位的活化对细胞间的黏附很重要。Li