斑疹伤寒立克次体的微生物学检查 .docxVIP

PAGE PAGE 1 斑疹伤寒立克次体的微生物学检查 一、生物学特性 1．形态结构呈多形性，以短杆状为主，大小为（0.6～2.0)um×(0.3～0.8)um。在感染的宿主细胞质中常簇拥存在，革兰染色镜检阴性，但不易着色，常用Gimenez或Giemsa法染色。Gimenez染色立克次体呈红色，背景为绿色；Giemsa染色呈紫色。结构与革兰阴性菌相像，具有细胞壁和细胞膜。最外层是由多糖构成的黏液层，在黏液层和细胞壁之间有微荚膜。其成分为脂多糖或多糖。细胞壁含胞壁酸、和，脂类含量比普通细菌高。细胞膜为类脂双分子层，含大量磷脂。细胞质内有核糖体和核质。2．培养特性 只能在活的真核细胞内生长，二分裂繁殖。鸡胚卵黄囊接种常用于立克次体的传代，通常采纳5～9日龄鸡胚，32～35℃孵育4～13天死亡，鸡胚死亡时光和接种剂量大小挺直相关；组织培养常用的细胞为鸡胚成纤维细胞、L929细胞和Vero细胞；初代分别通常挑选雄性豚鼠腹腔接种。3．抗原结构 斑疹伤寒立克次体有两种主要抗原：群特异性抗原和种特异性抗原。前者与黏液层的脂多糖成分有关，为可溶性抗原，耐热。后者与细胞壁外膜蛋白有关，为颗粒性抗原，不耐热。斑疹伤寒立克次体的脂多糖与一般变形杆菌某些X菌株的菌体抗原具有共同抗原，变形杆菌的抗原易于制备，且凝集反应结果易于观看，故在临床检验中常采纳这些X菌株代替立克次体抗原举行非特异性凝集反应，以检测人或动物血清中有无相应抗体，即外-斐反应（Weil-Felix reaction)，可用于立克次体病的辅助诊断，立克次体与变形杆菌菌株抗原间交错现象见表27-2。表27-2立克次体与变形杆菌菌株抗原间交错现象4．基因组 普氏立克次体Madrid E株基因组全长1111523 bp, G+C的摩尔分数为29.1％，由834个ORF组成；蛋白编码序列占75.4％,24％的非编码序列为原核生物之最。莫氏立克次体Wilmington株基因组全长1111496 bp，为单链环状DNA,G+C的摩尔分数为28.9％。5．反抗力 不耐热，56℃ 30min即可死亡，对低温的反抗力较强，可在冷藏肉类中存活1个月以上。在媒介动物的粪便中具有较强的抗千燥能力，可保持活性约2个月。对常用消毒剂敏感，如0.5％或来苏儿、75％等均可在数分钟内将其灭活。类、四环素类等抗菌药物可抑制其生长，普通无作用，对磺胺类药物不敏感。二、临床意义立克次体的致病物质主要为脂多糖和磷脂酶A两类。脂多糖具有与内毒素相像的毒性，可损伤血管内皮细胞，引起微循环障碍和中毒性休克等。磷脂酶A能损伤宿主细胞膜或溶解细胞内吞噬体膜，以利于穿入宿主细胞并在其中生长繁殖。此外，微荚膜具有黏附作用和抗吞噬作用，以增加对易感细胞的侵袭力。立克次体感染后可形成两次菌血症，其主要病理转变为血管内皮细胞增生、血管壁坏死、血栓形成等。此外，还伴有全身实质性脏器的血管周围广泛性病变，常见于皮肤、心脏、肺和脑，从而表现出相应的临床症状。（一）普氏立克次体普氏立克次体（R.prowazekii)是流行性斑疹伤寒（也称虱传斑疹伤寒）的病原体。传染源是患者，人体虱是主要传扬媒介，头虱亦可传扬本病，传扬方式是虱-人-虱。虱叮咬患者后，立克次体进入虱肠管上皮细胞内繁殖，当受感染的体虱再叮咬健康人时，常排粪于皮肤上，粪便中的立克次体通过抓破的伤口侵入人体。干燥虱粪中的立克次体也可经空气侵入呼吸道或眼结膜而使人感染。人感染普氏立克次体后，经10～14天埋伏期后急性发病，主要临床症状为高热、头痛和皮疹，有些患者还伴有神经系统、心血管系统或其他脏器伤害。（二）莫氏立克次体莫氏立克次体（R.mooseri）又称斑疹伤寒立克次体（R.typhl)，是地方性（或鼠型）斑疹伤寒的病原体。主要储存宿主是啮齿类，主要传扬媒介是鼠蚤，人多因受到鼠蚤的叮咬而感染。带有立克次体的干燥蚤粪也可经口、鼻或眼结膜进入人体而致病。临床症状与流行性斑疹伤寒相像，但发病缓慢、病情较轻，较少累及心肌和神经系统等。三、微生物学检查立克次体的传染性较强，易引起试验室感染，必需严格遵守试验室相关操作规程，以防止试验室感染的发生。（一）检验程序立克次体的检验程序见图27-1。图27-1立克次体的检验程序（二）标本采集病原体的分别或免疫学实验可采集患者的血液、病灶局部组织、血清等。流行病学调查时，尚需采集节肢动物、野生动物或家畜的脏器等。1．患者血液标本 于发病初期或急性期，尽可能在用法抗生素之前采血5～10 mL,立刻接种动物或培养基。倘若在发病1周后采血，为避开血清中可能存在的抗体或抗生素对分别培养的影响，最好将血液凝固，留血清供血清学实验，再将血块制成20％～50％的悬液接种。2．活检或尸检材料 采集活