菌种保藏原理与方法 .pptxVIP

菌种保藏原理与方法;2、连续移代;常见的衰退现象: 菌落和细胞形态的改变; 生长速度缓慢,产孢子越来越少; 抵抗力、抗不良环境能力减弱等。 代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力下降;;三、菌种的复壮;菌种的复壮措施:①纯种分离:(平板划线法、涂布法、倾注法、单细胞挑取法等)。 ②通过寄主体内生长进行复壮③淘汰已衰退的个体(采纳比较激烈的理化条件进行处理,以杀死生命力较差的已衰退个体)。④采纳有效的菌种保藏方法。;第二节 工业微生物菌种的保藏 ; 菌 连续在培养基上(内)移种 种 生活态 传代培养保藏法 连续在活宿主上(内)移种 保 固体斜面 藏 湿法 半固体琼脂柱 方 休眠态 液体介质(蒸馏水、糖液、其它溶液) 法 干法 藏在玻璃管内 吸附在合适的载体上;1、冷冻保藏法方法:菌种管低温保藏,定时传代 原理:低温下,微生物代谢强度明显下降 。;冷冻保藏种类 ;普通冷冻保藏技术(-20℃);应注意的是经过一次解冻的菌株培养物不宜再用来保藏。 保藏过程中应注意控制保藏温度,培养瓶或试管应严格密封。 这一方法虽简便易行,但不适宜多数微生物的长期保藏。 ;超低温冷冻保藏技术(-60一-80℃);假如待保藏菌种生长在斜面上,则可用含10％甘油的新配制液体培养基洗涤收获。超低温冰箱的冷冻速度一般控制在1-2℃／min。若干细菌和真菌菌种可通过此保藏方法保藏5年而活力不受影响。;液氮冷冻保藏技术 ;液氮冷冻保藏微生物菌种的步骤 1、待冷冻保藏菌种悬液的制备 (1)从生长斜面制备菌悬液:每一斜面加入5ml含10％甘油的营养液体培养;用巴氏吸管吹吸斜面制成孢子及菌体细胞悬液;0、5～lml分装玻璃安瓿或液氮冷藏专用塑料瓶, ; 2、控速冷冻 、 (1)将安瓿或液氮瓶置于铝盒或布袋中,然后置于一较大的金属容器中; (2)将此金属容器置于控速冷冻机的冷冻室中; (3)以1-2℃/min的致冷速度降温,直到温度达到相对温度之上几度的细胞冻结点(通常为-30℃); (4)补加一定量的液氮至系统中,使细胞在冻结点时尽估计快地发生相变;;3、 复苏 A 从液氮罐中取出所需的安瓿,马上置于冰浴中; B 迅速将安瓿置于37-40℃水浴中,并轻轻摇动以加速解; C 用巴氏吸管将安瓿中贮存培养物移接入含有2m1无菌液体培养基的试管中,用同一支吸管反复抽吸数次,然后取0、1-0、2ml (约4、8滴)转接入琼脂斜面上。;3、 干燥保藏法 将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材料上保藏。如砂土管法,适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌保藏,保藏时间几至几十年。;5 基因工程菌的保藏;当培养基中加入抗生素时,抗生素提供了一有利于携带质粒的细胞群体的极有用的生长选择压。而且在运用基因工程菌进行发酵时,抗生素的加入可帮助维持质粒复制与染色体复制的协调。 建议基因工程菌应保藏在含低浓度选择剂的培养基中。;菌种保藏机构的任务:广泛收集科研和生产菌种、菌株,并加以妥善保管,使之达到不死、不衰、不乱以及便于研究、交换和使用的目的。 菌种保藏机构: 中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM) 中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC) 美国典型菌种保藏中心(ATCC) 英国国家典型菌种保藏所(NCTC) 法国里昂巴斯德研究所(IPL) ;;;感谢您的聆听！