NP-40裂解液产品使用说明书.pdfVIP

Datasheet 爱必信（上海）生物科技有限公司 NP-40 Lysis Buffer NP-40 裂解液 产品信息 产品名称 产品编号 规格 储存条件 NP-40 Lysis Buffer NP-40 裂解液 abs9160 100ml -20 ℃保存 产品描述 NP-40 ，也称 Nonidet P-40 （乙基苯基聚乙二醇），是一种常见的非离子型去垢剂。 NP-40 裂解液（NP-40 Lysis Buffer ）是一种比较温和的细胞组织裂解液，主要成分为 50mM Tris-HCl （pH 7.4 ）， 150mM NaCl，1% NP-40 以及焦磷酸钠，正钒酸钠，氟化钠，EDTA 和抑肽酶等多种抑制剂，可广谱且有效 抑制蛋白降解，经本品裂解所得的蛋白样品，适用于常规的蛋白免疫印迹（Western Blot ），免疫沉淀（IP ） 和免疫共沉淀（Co-IP ）等实验。经本品裂解收集的蛋白样品，可使用增强型 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测 定总蛋白浓度。由于本品含有较高浓度的去垢剂，不适合用 Bradford 法来测定总蛋白浓度。 保存与运输方法 保存：-20℃冻存，1 年稳定。 运输：冰袋运输。 注意事项 1） 为了取得最佳的使用效果，建议第一次使用本品的时候将裂解液分装冻存，避免反复冻融。 2 ） 需自行准备PMSF 。可订购PMSF ，取适量溶于异丙醇、甲醇或乙醇配置成 100mM储存液， 根 据单次用量分装-20℃保存，建议 6 个月内使用。 3 ） 裂解样品的所有步骤需在冰上或 4℃进行。 4 ） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用方法 A 培养的细胞样品 1) 充分融解NP-40 裂解液，之后混匀。取适当量的裂解液，使用前数分钟内加入PMSF （Mw：174.2 g/mol）， 使其最终浓度为 1mM。 2) 贴壁细胞：吸除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（如果血清中的蛋白没有干扰，可忽略 此步）。按照六孔板的每孔细胞加入 150-250μl 裂解液的比例加量。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接 触。裂解 15-30 分钟，通常裂解液接触细胞 1-3 秒后，细胞就会被裂解。 悬浮细胞：离心收集细胞，用手指弹散细胞。按照六孔板的每孔细胞加入 150-250μl 裂解液的比例加入裂解 液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。 _____________________________________________________________________________________________________ ____________ 02128 email: info@ QQ: 800835708 Datasheet 爱必信（上海）生物科技有限公司 3)充分裂解后，10,000-14,000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、WB 和免疫沉淀等实验。 裂解液用量说明：通常 6 孔板每孔细胞加入 150μl 裂解液已经足够，如果细胞密度非常高可以适当加 大裂解液的用量到 200μl 或 250μl 。 B 组织样品 1） 将组织剪切成细小的碎片。 2 ） 充分融解NP-40 裂解液，之后混匀。取适当量的裂解液，使用前数分钟内加入PMSF （Mw ：174.2 g/mol）， 使其最终浓度为 1mM。 3 ） 按照每 20mg 组织加入 150-250μl 裂解液的比例加量。注意：如果裂解不充分可以适当添加用量，如果 需要高浓度的蛋白样品，可适当降低用量。 4 ） 用玻璃匀浆器匀浆直至充分裂解，此过程尽量控制在 1-2 分钟内，以减少蛋白的降解。 5 ） 充分裂解后，10,000-14,000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE