HPLC法测定不同产地桑椹药材中柠檬酸成分的含量.docVIP

HPLC法测定不同产地桑椹药材中柠檬酸成分的含量 摘要：目的 建立测定桑椹药材中柠檬酸含量的方法， 并测定其在不同桑椹药材中的含量。方法 桑椹药材采用水 作为溶剂加热回流提取，利用 HPLC法，采用KromasilC18色 谱柱(250mm x 4.6mm , 5卩m);使用0.6%磷酸水溶液为流 动相进行梯度洗脱；流速为 0.5ml/min-1 ；以 209nm 为检测 波长；柱温为30 C。结果 柠檬酸对照品在 0.10320〜 1.72000mg/ml-1 质量浓度范围内线性关系良好( r=0.9999 ) ； 精密度的RSD值为1.01% ( n=6);测得平均加样回收率为 98.29%, RSD值为0.93% (n=6)。结论 该方法简便、准确、 易行，可用于桑椹药材的质量控制。 关键词：桑椹药材；柠檬酸； HPLC法 中图分类号： R284.1 文献标识码： A 桑椹，又名桑椹子、桑果、桑子、是桑科桑属 mulberry (Morus alba L.)植物的果实。本属植物全球约有 16种，分 布于北温带、 亚洲热带和非洲热带及美洲地区。 我国约有 11 种，分布于全国大部分地区，以江苏、浙江等南方养蚕地区 产量较大 [1]。 1993 年国家卫生部把桑椹列为 “既是食品又是 药品”的农产品之一 [2]。 桑椹中含有丰富的糖类、 有机酸、 脂类、 维生素、 色素、 非色素酚和矿物质等成分 ［3］ 。目前，在桑椹营养成分的研究 的基础上，国内外对桑椹中功效成分的研究较多，主要集中 在桑椹色素、非色素酚、及多糖等成分上。柠檬酸是其中含 量较高的有机酸［4］，同时其具广泛的药理作用：①柠檬能防 止心血管动脉硬化并减少血液粘稠度；②中国中医认为，柠 檬性温、味苦、无毒，具有止渴生津、祛暑安胎、疏滞、健 胃、止痛等功能利尿，调剂血管通透性；③柠檬酸热量低， 且具有很强的收缩性，因此有利于减少脂肪，是减肥良药； ④具有防止和消除皮肤色素沉着的作用；⑤ ？痰作用等［5-7］。 因此，本文建立一种准确定量桑椹药材中的柠檬酸含量的方 法。 1 仪器与试药 1.1仪器岛津高效液相色谱仪（Prominence UFL。，日 本岛津公司；1/10万电子分析天平，型号 ME235S，德国塞 多利斯公司；电热套（1000 ml），上海科析实验仪器厂； KQ-300DE数控超声波发生器，昆山超声仪器有限公司。 1.2试药 磷酸，AR级，天津市富宇精细化工有限公司； 水，自制；柠檬酸（批号 111679-200401 ）对照品，购自中 国食品药品检定研究院； 桑椹药材：安徽产地（批号，新疆药材（批号20150419， 较广产地批号（，河南产地（批号 ，江 苏产地（批号，四川产地（批号，陕 西产地（批号）由陕西君碧莎制药有限公司提供。 2 实验方法 2.1 色谱条件 色谱柱为 KromasilC18 （ 250 mm x 4.6 mm , 5卩m）;流动相：0.6%磷酸水溶液；检测波长： 209 nm ; 流速：0.5 ml/min ;柱温：30C ；进样量10卩l。 2.2 对照品溶液的配制 精密称取柠檬酸对照品 17.2 mg， 置 10 ml 容量瓶，加蒸馏水溶解并稀释至刻度， 超声并摇匀， 滤过，取续虑液，作为母液，备用。 2.3供试品溶液的制备 取样品粉末（过4号筛）2 g,精 密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入蒸馏水 100 ml，称定重 量，加热回流提取1h，放冷，再精密称定重量，用水补足 减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.4 标准曲线及线性范围 量取母液 0.30， 0.50， 1.00， 2.00, 4.00 ml，分别置于5 ml量瓶中，加蒸馏水溶解并定 容至刻度， 滤过，分别得到浓度为 0.10320、0.17200、0.34400、 0.68800、1.37600 mg/ml 的对照品溶液,按上述条件测定峰 面积，以对照品峰面积值（y）为纵坐标，柠檬酸浓度（x） 为横坐标进行线性回归。结果：柠檬酸的质量浓度范围 （mg/ml ）、线性方程及相关系数（r）分别为：线性范围为 0.10320 〜1.72000 mg/ml，回归方程为 y=1278680x+1614, r=0.9999。结果表明对照品在相应浓度范围内线性关系良好。 2.5 精密度实验 精密量取线性样品溶液（浓度为 1.72 mg/ml ）1.07 ml 于 5 ml 量瓶中加蒸馏水至定容至刻度， 得浓 度为 0.36808 mg/ml ，按上述色谱条件重复进样 6 次，测得 柠檬酸