RPMI1640培养液配制与滤过除菌 .docxVIP

PAGE PAGE 1 RPMI1640培养液配制与滤过除菌 1．仪器电子分析天平，一般冰箱，恒温磁力搅拌器，高压蒸汽灭菌器，恒温烤箱，超滤器，超净工作台，pH计。2．材料与试剂干粉，超滤器衔接套件，0.22μm孔径超滤膜，无菌试剂瓶（200或500ml)，棉球，250ml烧杯，l000ml容量瓶，NaHCO3(AR)，注射液，lmol/L溶液，lmol/L溶液，7.5%NaHCO3溶液，多层纱布，称量纸，药匙，标签纸，记号笔。[操作步骤]1．配液前预备(1)超滤器包装灭菌拆卸、清洗超滤器，加载1-2张0.22μm孔径超滤膜，重新组装超滤器。用8层纱布小包，绑扎后置高压蒸汽灭菌器121℃灭菌20min。灭菌后，置恒温烤箱内50℃鼓风干燥2h。(2)试剂瓶的清洗灭菌预备足量的试剂瓶以便滤过后对培养液举行分装。(3)超净工作台除尘、紫外消毒除尘后，开启风淋，照耀紫外30-40min。直至培养液滤过分装结束前，不得关闭超净工作台的风淋。2．称量溶解(1)按照RPMI1640干粉培养基的包装解释，称量NaHCO3，在250m1烧杯内搅拌溶解后，转移到容量瓶内。(2)称量合适的抗生素，搅拌溶解后合并到容量瓶内。如取8×104-1×105U硫酸庆大霉素稀释，然后合并。(3）溶解包装小袋内的所有培养基干粉，搅拌充分后，合并到容量瓶内。用法辅料镊在容量瓶外壁辅助，当心转移烧杯内的搅拌子到容量瓶内。(4）测定pH，调整pH为7.2-7.4。用法lmol/LHCl或lmol/LNaOH溶液调整pH。也可用法7.5%NaHCO3溶液调整pH，或溶液中通入CO2气体调整pH。(5）定容后，充分搅拌1-2h。3.滤过分装用法灭菌后的，预装有0.22pm孔径超滤膜的超滤器在超净工作台内举行滤过除菌，分装后，加写标识，然后4℃保存。[注重事项]严格滤过分装时所用的无菌操作条件是否合理、齐全，滤过过程的操作是否严格无菌操作。