真核细胞的制备和逆转录与“细胞”有关的文档.pptx

真核细(Xi)胞的制备和逆转录; RNA通常以单链形(Xing)式存在，但也可形(Xing)成局部的双螺旋结构。 RNA分子的种类较多，分子大小变化较大，功能多样化。;RNA的(De)种类、分布、功能;一、实验(Yan)目的和原理;掌握真核细胞RNA提取方法 掌握逆转录聚合酶链(Lian)反应的基本原理、实验基本条件 ; 熟悉PCR反应条件的优化和注意事项，PCR引物设计的基本原则，定量PCR的原理和用途。 ;RT-PCR扩增目(Mu)的基因原理;第七页，共二十六页。;真核细胞RNA提取方(Fang)法 ;;RNA分离的最关键因素是尽量避免RNA酶的污染。 实???中所用到的全部溶液、玻璃器皿、塑料制品都需特别处理。一方面避免外源RNase的污染。要做到如下几点：①操作戴口罩和手套；②实验室保持洁净；③玻璃器皿须用0.1%二乙基焦碳酸盐（DEPC）浸泡处理，并高压灭菌，250℃烘干4小时以上（高压不能完全灭活(Huo)RNase）；④所有溶液（除Tris外）须经DEPC浸泡处理；⑤实验中所有塑料器材最好灭菌后一次性使用，所有化学试剂用新包装。另一方面排除内源RNase污染。内源RNase是由组织细胞中携带，细胞破碎后即释放出来。因而力争在提取的起始阶段对RNase活力进行有效抑制，主要方法是使用RNase抑制剂，常用的有盐酸胍、异硫氰酸胍、RNase阻抑蛋白（RNasin）和氧钒