酵母RNA的提取实验报告.pdfVIP

仅供个人参考 酵母 RNA的提取紫外吸收法测 RNA浓度实验报告 一、实验目的 1、掌握稀碱法提取酵母 RNA的原理和方法。 ? 2、掌握紫外线（ UV）吸收法测定核酸浓度的原理。 ? 3、熟悉紫外分光光度计的使用方法。 ? 二、实验原理 核酸是生命的最基本物质之一，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内。 对核酸的研究是更深入研究生命体的基本前提之一。 研究核酸需要纯度很高的核 酸，所以核酸的提取方法也就在生物学研究中相当重要。 本次实验提取酵母的核 糖核酸（ RNA）。RNA离体后稳定性很差，含量低，所以在提取的时候就要注意防 止核酸的降解和变性，防止过酸、过碱、避免剧烈搅拌，尤其重要的是防止 RNA 酶的作用。本实验是医药卫生领域与大工业生产的基础方法。 核酸（ RNA）都是由核苷酸组成的多聚核苷酸化合物，而核苷酸是由糖、碱 基和磷酸以等分子比例构成的， 故测定组成核苷酸的任意一种组分即可以测定生 物体内核酸的含量或者是提取出来的核酸的含量。 ? 提取 RNA的方法很多，在工业生产上常用的是稀碱法和浓盐法。 前者是利用碱使 细菌细胞壁溶解， 是 RNA释放出来， 后者是在加热的条件下， 利用高浓度的盐改 变细胞膜的通透性， 使 RNA释放出来。 使用浓盐法提取 RNA的时候应该注意掌握 温度，直接至 90~100℃浸提，避免在 20~70℃的时间过长， 因为这是磷酸二酯酶 和磷酸单酯酶的作用活跃的温度范围， 会使 RNA降解而降低提取率。 这两种方法 是从废弃的啤酒酵母中提取 RNA的一般方法。但是这两种方法各有利弊， 如浓盐 法提取的 RNA纯度高，而稀碱法提取的时间短，提取率高，更利于工业化生产。 RNA在 260nm处有最大吸收峰，一定浓度范围内其浓度与吸光度成正比，故 可以用紫外分光光度计通过比色来测定 RNA含量。 ? 由于蛋白质在 280nm波长处也有光吸收， 对 RNA测定有一定的干扰作用， 但蛋白 质的最大吸收峰在 280nm处，如同时测定 280nm的光吸收，通过计算可消除其对 RNA测定的影响。 因此如其中含有蛋白质时必须同时测定 280nm和 260nm的吸光 度，可通过计算测定溶液中 RNA的含量。 三、实验器材 电子天平、离心机、量筒、烧杯、锥形瓶、紫外分光光度计、 容量瓶 （100mL）、 移液管（ 5ml ）、试管和试管架、 PH 1-14 试纸 不得用于商业用途 仅供个人参考 四、实验试剂 0.2%NaOH、酸性乙醇（ 5mlHCl 加入剂、 500ml 95% 乙醇）、95%乙醇、无水 乙醇、酵母粉、第一次实验所提取的酵母 RNA、标准 RNA液 （100ug/ml ）、0.2%NaoH 溶液、蒸馏水 ? 五、实验步骤 1、称取 4g 干酵母粉，放入 200ml 锥形瓶中，加入 40ml0.2%NaOH，沸水浴 30 分钟，后流水冷却。将冷却后的液体倒入离心管中， 离心 15分钟，4000转/min 。 留上清液，加入 95%酸性乙醇溶液 40ml ，边加边搅拌，再 4000 转/min 离心 5min。 保留沉淀，用 10ml95%乙醇洗沉淀两次，每次洗后离心 3000 转/min ，5 分钟。洗 完后，再用 10ml 无水乙醇分别洗涤两次，每次洗后离心 5min，3000 转/min 。最 后，收集沉淀于滤纸上，保存备用。