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人脐带间质干细胞分离纯化及基本生物学特性研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：人脐带间质干细胞分离纯化及基本生物学特性研究 1 1 材料和方法 3 2 结果 5 3 讨论 7 文2：金钗石斛生物学特性研究 8 1 分布及适生环境 9 2 生物学特性研究 10 3 讨论 12 参考文摘引言： 13 原创性声明（模板） 14 文章致谢（模板） 14 正文 人脐带间质干细胞分离纯化及基本生物学特性研究 文1：人脐带间质干细胞分离纯化及基本生物学特性研究 ［ABSTRACT］ObjectiveTo explore the isolation， purification and expaion method of human umbilical cord derived mes-enchymal stem cells （UCMSC）. MethodsThe umbilical cords from cesarean newbor were collected in sterile condition. Me- senchymal stem cells were obtained by enzyme digest method and cultured in DMEM/F12 medium. Surface antige of UCMSC were detected by FACS. The cell growth curve and cell cycle of UCMSC were analyzed. ResultsMSCs could be obtained by both of the two methods. After 12-14 days of primary culture， isolated MSCs reached 90% confluence and the cells could expand at least 20 passages. FACS analysis showed that UCMSCs were positive for CD13， CD29， CD44， and CD105 and negative for CD106， CD34， CD11a， CD14， CD31， and CD45. ConclusionUmbilical cord derived MSCs has strong proliferation capacity， which can be used as the seed cells for tissue engineering. ［KEY WORDS］umbilical cord; mesenchymal stem cell; biology;cell separation 间质干细胞（MSC）是最早由FRIEDETEIN发现，存在于骨髓中的一类成体干细胞，可在体外培养扩增，并能在特定条件下分化为成骨细胞、成软骨细胞、肌肉细胞、脂肪细胞，是细胞工程重要的种子细胞之一［1］。近年来，国内外多个实验组报道了骨髓MSC（BMMSC）体外特定条件下能转化为神经元样细胞，使BMMSC受到了越来越多的关注［2］。但在临床上，骨髓取材较困难，供体有限，随年龄增长BMMSC增殖能力、多向分化能力下降，且有病毒污染的可能［3］。这些限制了BMMSC的进一步临床应用。寻找其他来源的MSC成为近年来的研究热点。新近有研究报道MSC不仅存在于骨髓，还存在于外周血，尤其是脐带血，更有研究报道从胎儿肝脏、肺脏、肾脏等部位提取到了MSC［4］，表明MSC 不仅存在于血液系统，也存在于实质组织内。但脐带血MSC含量稀少，分离极其困难，胎儿MSC的应用则受到伦理学的限制。脐带血及胎儿内脏均存在MSC，脐带作为新生儿的一部分并且是分娩废弃物，其中是否也含有并能否提取到足量的MSC引起本研究室的关注。本文拟探讨从脐带获取MSC的方法及其基本生物学特性。 1 材料和方法 材料 脐带组织取自天津市中心妇产医院剖宫产足月新生儿，均经父母授权同意。主要试剂和诱导剂:DMEM/F12培养液（Hyclone公司）、胎牛血清（Fe-talbovineserum，中国医学科学研究院血液病研究所）、碘化丙啶（BD公司）、胶原酶Ⅳ（Sigma公司）、brdU（Sigma公司）、兔抗人brdU抗体（北京中杉生物技术公司）、SP试剂盒（北京中杉生物技术公司）、流式抗体（除FITC-CD105购自Ancell公司，其余均购自美国BD公司）。RT-PCR试剂购自Invitro-gen公司，引物由上海博亚生物公司合成。 脐带MSC