淀粉糊化实验报告.docxVIP

______________________________________________________________________________________________________________ 淀粉糊化度的测定 一、 实验目的 掌握酶解法测定淀粉糊化度原理和方法 . 实验原理 酶解法，淀粉经糊化后才能被淀粉酶作用，未糊化的淀粉（生淀粉）不能被 淀粉酶作用。加工样品中的淀粉通常为部分糊化，需要测定其糊化度。将样品、 完全糊化样品分别用淀粉酶 （本实验用糖化酶） 水解，测定释放出的葡萄糖含量， 以样品的葡萄糖释放量与同一来源的完全糊化样品的葡萄糖释放量之比来表示 淀粉糊化（熟化）度。 二．实验仪器和试剂 仪器：天平（灵敏度 0.001 ）、恒温水浴、分光光度计 试剂：缓冲液（将 3.7ml 冰醋酸和 4.1g 无水乙酸钠溶于 100ml 蒸馏水，定容至 1000ml ，必要时可滴加乙酸或乙酸钠调节 PH 值至 4.5 左右）、 酶溶液（将 1g 葡萄糖淀粉酶（糖化酶）溶于 100mL 缓冲液，过滤。（现配，共 用））、蛋白质沉淀剂、 ZnSO4 7H 2 O,10%(W / V ) 蒸馏水溶液、 0.5N NaOH 、 铜试剂、磷钼酸试剂 三．实验步骤 精品资料 ______________________________________________________________________________________________________________ 1、准确称取两份样品（加工后的碎米粉） 100mg 于 25ml 刻度试管，其中一份 供制备完全糊化样品，另一份为测定样品。 1）完全糊化样品：向样品中加入 15ml 缓冲液，记录液面高度，混匀后将试管置于沸水浴中加热 50min （期间摇动 2 ~3 次），用自来水冷却试管，滴加适量蒸馏水使液面恢复到加热前位置，即为完全糊化样品。 2）测定样品：向待测样品中加入 15ml 缓冲液。 3）空白：取一支空的 25ml 刻度试管，加入 15ml 缓冲液。 2、分别向上述 3 支刻度试管中加入 1ml 酶溶液，在 40 ℃水浴中保温 50min ，起 初摇动一次，以后每隔 15mln 摇动一次。 3 、 保温 50min 之 后， 分 别 加入 2ml 10% 的 ZnSO4 7H 2O , 混 匀， 再 加 1ml 0.5N NaOH ，用水稀释至 25ml ，混匀，过滤。 4、准确吸取 0.1ml 滤液和 2ml 铜试剂，分别加入 3 支 25ml 刻度试管中（清洗 干净再标号），将试管置于沸水浴中 6min （开盖），保持沸腾，沸水浴加 2ml 磷 钼酸试剂，继续加热 2min 。 5、用自来水将试管冷却，加蒸馏水定容至 25ml ，堵住试管口（可用手套的拇指 或手掌），反复颠倒试管使之混匀。 6、用分光光度计在 420nm 处读出吸光值 7、测定样品糊化（熟化）度的公式计算 测定样品光吸收 — 空白光吸收 糊化度（ %）= 完全糊化样品光吸收 — 空白光吸收 四、实验结果 每份加工的米粉分别称量 100mg ，分别进行糊化，酶解，最后测定的吸光值如 下 精品资料 ______________________________________________________________________________________________________________ 样品 吸光值 完全糊化样品 0.175 待测样品 0.109 空白 0.032 测定样品的糊化度为： 糊化度（ ） 测定样品光吸收 — 空白光吸收 0.109-0.032 ×100%= % = 完全糊化样品光吸收 — 空白光吸收 0.175-0.032 =53.85% 五．结果分析： 1、完全糊化时，经常要打开水浴锅的锅盖，仪器的设定问题，温度不够 100 ℃， 糊化程度不够。 2、配制酶溶液中，可能有一部分酶已经在贮存的过程中变形或者失效，导致糊 化度偏低。 3、样液定容过程中，由于温度过高，导致定容不准确，结果有偏差。 精品资料 ______________________________________________________________________________________________________________ Welcome To Download !!! 欢迎您的下载，资料仅供参考！ 精品资料