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会计学 1 生物技术细胞工程 主要内容 第一节 概 述 第二节 植物细胞工程 第三节 动物细胞工程 第四节 微生物细胞工程(发酵工程) 第1页/共155页 第一节 概 述 细胞工程概念 2. 细胞工程的发展 3. 细胞工程的基础知识 4. 细胞工程的相关技术 5. 细胞工程的应用 第2页/共155页 细胞工程（cell engineering）：在细胞水平上，采用类似工程设计的方法，运用精巧的细胞学技术，有计划地改造遗传结构，从而获得特定的细胞及产物的有关理论和技术方法的学科。 1. 细胞工程概念 第3页/共155页 广义的细胞工程 包括所有的生物组织、器官及细胞离体操作和培养技术 狭义的细胞工程 指细胞融合和细胞培养技术。 1. 细胞工程概念 第4页/共155页 根据不同的研究层次，细胞工程分为 染色体工程、染色体组工程、细胞质工程、和细胞融合工程 1. 细胞工程概念 第5页/共155页 染色体工程 是按人们需要，添加，削减或替换生物染色体的技术，根据操作对象的不同，分为动物染色体工程和植物染色体工程。 染色体组工程 改变染色体组数的技术。如单倍体转变为多倍体，三倍体西瓜 第6页/共155页 细胞质工程 又称细胞拆合工程，是通过物理或化学方法将细胞质与细胞核分开，再进行不同细胞间核质重新组合，重新建成新细胞 细胞融合工程 是利用自然或人工的方法使两个或几个不同细胞融合为一个细胞的过程 第7页/共155页 根据研究对象不同，细胞工程可分为 动物细胞工程 植物细胞工程 微生物细胞工程 第8页/共155页 2、细胞工程的发展 第9页/共155页 细胞工程的发展 植物细胞培养起源：20世纪初 20世纪30年代，植物细胞培养研究取得突破 1955年，激动素能促使培养细胞分裂 20世纪60年代，建立植物原生质体培养和融合技术 20世纪70年代，外源基因能够植入植物细胞体内 1983年，第一个转基因植物培育成功 20世纪90年代后，转基因植物进入产业化 第10页/共155页 动物细胞工程 起源于疫苗的生产，1920-1950年，开发出病毒或细菌疫苗 1951年开发能促使动物细胞体外培养技术 50年代以后开始大规模培养动物细胞生产生物制品 70年代基因基因重组和杂交瘤技术的研究 1982年重组人胰岛素研究成功，标志着细胞工程商业化的开始 第11页/共155页 细胞工程的发展前景 第12页/共155页 过程 离体的植物器官、组织或细胞 愈伤组织 根、芽 植物体 外植体 脱分化 植物激素： 细胞分裂素、生长素 再分化 植物组织培养 植物组织培养条件： 含有全部营养成分的培养基、一定的温度、空气、无菌环境、适合的PH、适时光照等。 第13页/共155页 第14页/共155页 第15页/共155页 原生质体A 原生质体B 原生质体融合 正在融合的原生质体 再生出细胞壁 杂种细胞 愈伤组织 杂种植株 纤维素酶 果胶酶 物理方法 化学方法： 离心 振动 电刺激 聚乙二醇 植物组织培养 植物细胞融合 过程 第16页/共155页 第17页/共155页 细胞分化和全能性 多细胞生物体是由各种各样形态和功能都不同的细胞群所组成。高等动、植物由受精卵细胞开始的胚胎发生过程随着细胞分裂次数的增加而使得早期胚胎的细胞数量也增加许多。其中有些细胞在形态、结构和功能上逐渐发生了差异，这种细胞之间差异的发生过程就是细胞分化。个体发育的过程就是细胞分化的过程，个体的各种器官和组织都是通过细胞分化形成的。 3.细胞工程的基础知识 第18页/共155页 爪蟾的细胞核移植实验，证明细胞核的全能性 第19页/共155页 4. 细胞工程的相关技术 无菌操作技术 细胞培养技术 细胞融合技术 细胞核移植 胚胎移植 染色体工程 克隆 第20页/共155页 无菌操作技术 细胞工程的所有试验都要求再无菌条件下进行，要求十分严格的无菌操作。 1、无菌室； 2、超净工作台； 3、生物材料的消毒； 4、试验器械、器皿和药品的灭菌。 第21页/共155页 无菌操作室的灭菌与消毒 缓冲间 无菌室 首次启用的无菌室一般可采用福尔马林熏蒸（5～6m2无菌室用KMnO4 50g，倒入100ml甲醛（用搪瓷盘），冒浓烟，24hr，氨水中和至无甲醛味），经常使用的无菌室在每次实验前必须开启紫外灯照射0.5至l小时，然后避光0.5至l小时后方可进入操作 第22页/共155页 无菌室 上风口 下风口 第23页/共155页 缓冲间 第24页/共155页 培养器材的消毒 干热灭菌法：玻璃器皿、金属器具等的 消毒方法，140～150℃，2～3小时 ； 湿热灭菌法：橡胶制品、无菌衣、帽和口罩以及除菌过滤器的清毒，高压蒸汽灭菌115℃