葡聚糖的应用.pptxVIP

葡聚糖的应用骨髓和实体器官移植广谱抗生素治疗AIDS肿瘤和免疫抑制治疗插管等侵袭性治疗第1页/共39页侵袭性真菌感染率上升—第2页/共39页医学和相关科学的进步 危重病人的存活期延长延长了真菌感染的 高 危 期使此类患者业已增加的人数进一步扩大严重真菌感染迅速上升势头是日益严重的威胁！第3页/共39页真菌感染的危险因素：中心静脉插管尿道插管广谱抗生素气管插管腹部外科肠胃外营养营养不良住院时间感染之前定殖第4页/共39页侵袭性真菌感染条件致病性真菌念珠菌病曲霉病隐球菌病其他第5页/共39页诊断方法影像学组织病理学/细胞学培养血清学分子生物学方法： Platelia Aspergillus ELISA Fungitell assay PCR（unavailable）传统的方法第6页/共39页真菌病实验室诊断主要内容准确、快速检出真菌病原体真菌镜检真菌培养组织病理生理生化血清学方法分子生物学第7页/共39页镜检和培养方法敏感性低 血培养：在肿瘤和血液病病人中，50%尸检证实深部念珠菌感染的病例血培养阴性。培养结果阳性仅表示存在某种真菌，区分定植和感染困难培养时间长有些标本采集困难非培养方法优点第8页/共39页快速报告结果敏感性提高取材简便多以真菌在致病状态产生的物质为检测标志物，结果阳性提示有致病性定量检测可判断感染严重程度及疗效评估非培养诊断的方法简介第9页/共39页真菌细胞壁成分（1-3） - β- D-葡聚糖检测（G试验） 真菌抗原检查半乳甘露聚糖（galactomannan) 抗原（GM) 甘露聚糖(mannan)抗原隐球菌荚膜多糖抗原（乳胶凝集试验）真菌特异的代谢产物D-阿拉伯糖醇真菌 DNA 的检测第10页/共39页临床诊断、拟诊的微生物学1 合格痰标本直接镜检发现菌丝，且连续培养≥2次分离到同种真菌2支气管肺泡灌洗液 (BALF)经直接镜检发现菌丝真菌培养阳性3 痰液或BALF直接镜检发现新生隐球菌4 乳胶凝集法检测隐球菌荚膜多糖抗原阳性5 G实验连续两次阳性6 GM实验连续两次阳性侵袭性真菌感染的诊断标准EORTC/MSG2008修订版第11页/共39页宿主因素临床特征病原学真菌镜检真菌培养组织病理学检查血清学检查方法（间接证据）CSF隐球菌抗原阳性——确诊GM-test, G-test——临床诊断Clinical Infectious Diseases 2008; 46第12页/共39页（1,3） - β- D-葡聚糖检测mannoproteins b1,6葡聚糖磷脂双分子层几丁质b1,3葡聚糖合成酶麦角固醇第13页/共39页真菌细胞膜、壁结构β1,3羊毛固醇C－14去甲基化酶14位还原和7－8位异构酶角鲨烯环氧化酶1,3-β-D-葡聚糖结构第14页/共39页葡聚糖广泛存在于真菌细胞壁中1,3-β-D-葡聚糖占真菌壁成分50%以上，是真菌细胞壁上的特有成分以1,3-β-糖苷键连接的葡萄糖残基骨架作为主链以分支状1-6-β-D葡萄糖残基作为侧链1,3-β-D-葡聚糖特性第15页/共39页对热极为稳定，高压121℃并不能使其灭活。在念珠菌和曲霉菌细胞壁中含量较多，对G实验灵敏。当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞的吞噬、消化等处理后，(1-3)-β-D-葡聚糖可从胞壁中释放出来，从而使血液及其它体液中含量增高。当真菌在体内含量减少时，机体免疫系统可将其清除。在浅部真菌感染中，(1-3)-β-D-葡聚糖未被释放出来，故其在体液中的量不增高。可用于检测念珠菌、毛孢子菌、曲霉菌、镰刀菌、卡氏肺孢子菌不可检测隐球菌、接合菌（根霉/毛霉等）第16页/共39页“G”试验缘何而来？光度（显色）法 动态显色法 终点显色法第17页/共39页定量检测1-3-β-D-葡聚糖的方法 光度（浊度）法 动态浊度法 终点浊度法（1-3）?-D-GlucanTAL-RM(鲎试验非内毒素反应物 )试验反应机理图：活化G因子G因子凝固酶凝固酶原 显色寡肽 寡肽+显色基团（黄色） （光度法测定）第18页/共39页 G 试 验 的 基 本 原 理1-3-β-D-葡聚糖可特异性激活鲎的变形细胞裂解物中的G因子，引起裂解物发生颜色变化，故称G试验。分析前注意事项第19页/共39页采用无热原采血管抽血后2h内送检血标本4-8℃最多存放48h检测环境应保持清洁1,3-β-D-葡聚糖相关影响因素第20页/共39页以下情况可出现假阳性：使用纤维素膜进行血透，标本或患者暴露于纱布或其他含有葡聚糖的材料；静脉输注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品；链球菌血症；操作者处理标本时存在污染；使用多糖类抗癌药物、放化疗造成的粘膜损伤导致食物中的葡聚糖或定植的念珠菌经胃肠道进入血液等也可能造成假阳性。 1,3-β-D-葡聚糖检测临床价值第21页/共39页早期