可降解塑料的生物合成.pptVIP

②连续培养的方法是将新鲜的培养基连续地加入有均匀培养液的反应器中，同时排出发酵液，使培养环境如底物浓度、产物浓度、细胞浓度、比生长速率等可不随时间变化而变化，保持培养的稳定状态。在连续培养中，任何一种营养成分都可以用作限制性底物。 ③所谓流加培养，又称半连续发酵，是指在培养过程中不断向反应器内加入培养基，但不同时取出培养液的培养方法。它是一种介于分批培养和连续培养之间的培养方法。兼有两者的优点，而又克服了两者的缺点。和传统的分批培养相比，流加培养可以解除底物抑制、葡萄糖效应、代谢阻遏等；与连续培养相比，流加培养的染菌可能性小，也不易产生菌种老化变异等。 第三十页，共56页 所谓限制性底物，是指在培养微生物的营养物质中，对微生物的生长起到限制作用的营养物。 由于许多微生物只有在氮、磷或氧等缺乏而碳源过量的不平衡生长条件下才能大量积累PHAs，所以在PHAs的发酵生产中，一般可将发酵过程分成两个阶段来进行控制： 第一阶段为菌体细胞的形成阶段，在此阶段微生物利用基质形成大量菌体，而多聚体PHAs的积累量很少； 第二阶段为多聚体形成阶段，在此阶段PHAs大量形成而菌体细胞基本上不繁殖。 第三十一页，共56页 在简单分批培养过程中，当菌体生长进行到一定浓度时，培养基中一种或几种营养物质的浓度可能成为菌体细胞进一步繁殖的限制因素，而简单地增加该种营养物质的初始浓度不可能导致菌体生长量的相应增加，相反某些成分在较高浓度时对细胞会产生毒害作用，另一些还可能形成沉淀，因而采用分批发酵法不能获得很高的细胞干重以及高的产物浓度和生产强度。 而采用流加发酵法进行PHAs的生产时，就可以在某些必需的营养成分成为生长限制因素之前，对其进行定量流加，延长细胞的对数生长期，从而可获得较高的菌体浓度。 第三十二页，共56页 （一） 采用流加培养法生产PHB 在实际应用中，通常选择限制培养基中的氮源作为流加控制的手段，因为微生物的生长对氮源的依赖比对其他离子更强，微生物对氮源的同化作用也比其他离子更快。 研究发现，在流加培养过程中，控制恰当的碳氮比相当重要。为什么？ 在PHB 合成阶段开始时，采用较低的碳氮比可以保持细胞具有较高的PHB合成能力，随着胞内PHB 含量的增加，微生物细胞的PHB合成能力下降，这时可逐渐增加培养基中的碳氮比。 第三十三页，共56页 在流加培养过程中，可以通过在线检测尾气中CO2浓度，来间接估计胞内PHB含量，达到适时控制培养过程中碳氮比的目的。 真氧产碱杆菌A.eutrophus是到目前为止对其动力学和代谢途径研究得较为透彻的、也是唯一已用于工业过程来生产多聚体的一类微生物，此菌能利用多种基质如葡萄糖、果糖、乙酸、丁酸或H2、O2和CO2的混合气体等来合成PHB。 第三十四页，共56页 通过对真氧产碱杆菌其生长过程的动力学研究发现，在菌体生长阶段和PHB形成阶段之间存在一短暂的过度阶段，此过程阶段在氮源耗尽的同时形成，仅维持不到一个世代时间，此时，残留菌体和蛋白质的形成速率降为零，并且它们的含量在随后的时间内保持恒定，而PHB的形成速率迅速达到最大值，随后逐渐下降至最终为零。 很明显，在以氮源为限制条件的PHB形成过程中，限量添加氮源能促进PHB的积累，这些结果与前面提到的用甲基营养菌合成PHB的情况相一致，在PHB形成阶段维持很低浓度的氮源时， PHB的形成速率比不加氮源的情况要高。 第三十五页，共56页 （二） 采用流加培养法生产共聚物P（HB-co-HV） 由3-羟基丁酸和3-羟基戊酸聚合而成的共聚物P（HB-co-HV） 是瓦尔恩等人在1974年从活性污泥的絮凝物中分离出的第一个共聚物，也是目前最具工业前景和吸引力的共聚物。 在共聚物P（HB-co-HV）的生产过程中，流加发酵操作比分批发酵具有明显优势。为什么？ 丙酸或戊酸是生产共聚物P（HB-co-HV） 所必需的基质，由于这些有机酸对菌体细胞具有一定的毒性，采用流加培养法，可避免由于培养基中有机酸的积累而使细胞活力受到损害，从而达到提高P（HB-co-HV） 产率的目的。 第三十六页，共56页 除3-羟基丁酸外，现在已知有40多种不同的脂肪酸可作为PHAs的组成成分。 最近的研究发现，大多数能积累PHB的微生物也具有积累共聚物P（HB-co-HV）的能力，而且各种微生物从有机酸合成共聚物P（HB-co-HV）的途径和对有机酸的耐受能力也各不相同。 由于所用的