叶绿体分离与荧光染色观察.docxVIP

叶绿体分离与荧光染色观察 实验目的 通过植物细胞叶绿体的分离与纯化，了解细胞器分离与纯化的原理和方法。 熟悉荧光显微镜的使用方法，观察叶绿体的自发荧光和次生荧光。 实验原理 叶绿体分离的原理 匀浆破碎细胞，利用差速离心方法分离等渗介质中的悬浮颗粒，收集类叶绿体大小的颗 粒，得到叶绿体。 差速离心：颗粒在离心场中的沉降速率取决于顆粒的大小、形状和密度，也同离心力以 及悬浮介质的粘度有关。在一给定的离心场中，同一时间，密度和颗粒大小不同的颗粒其沉 降速率不同。 依次增加离心力和离心时间，就能使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉 降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。 叶绿体的分离应在等渗溶液（0. 35mol/L的氯化钠或0.4mol/L的蔗糖溶液）中进行， 以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。分离过程最好在0-5。（2的条件下进行，如果在室温下, 要迅速分离和观察。 差速离心 特点：介质密度均一，速度由高到低，逐级离心； 用途：分离大小相差悬殊的细胞和细胞器； 沉降顺序：核 线粒体 溶酶体与过氧化物酶体 质网与高尔基体—核蛋白体, 可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯度离心再行分离纯化。 荧光的概念 光致发光：某些物质在照射下，吸收光能进入激发态，当从激发态回到基态时，可以以 电磁辐射的形式释放出吸收的光能，这种现象称为光致发光”。紫外辐射、可见光及红外 辐射均