大鼠肾小管上皮细胞的分离与培养 .docxVIP

PAGE PAGE 1 大鼠肾小管上皮细胞的分离与培养 肾小管上皮细胞培养的要点是从基质中可分别出肾小管细胞，由于这些细胞含有D-，能在D-缬氨酸中生长，而基质细胞则不可。用消化切碎的肾脏组织10小时左右，经吸管吹打可获得肾小管及肾小球上皮细胞。 【材料】1．组织来源Wistar大鼠，体重50g。2．培养基RPMI 1640、新生小牛血清、（5ug/ml) ,（36ng/ml)、入转铁蛋白（5 ug/ml)、表皮生长因子（10ug/ml）等。3．消化液及试剂0.25%,Hanks液。4．器具80目、100目不锈钢筛网或尼龙筛网、培养皿、解剖刀、剪、镊。【办法】1．大鼠于试验前12小时开头禁食，可自由进水。2．大鼠麻醉致死，全身浸泡于75％中消毒后，于无菌条件下取肾，置于生理盐水的培养皿中，剥离肾包膜，用剪刀剪下肾皮质并将其剪碎，置于80目不锈钢筛网上研磨，并以生理盐水冲洗，将滤液倒至100目不锈钢筛网上，收集网上组织块移于培养皿中，充分吹打后，以1000r/min离心10分钟。3．离心后弃上清液，加入0.25%胰蛋白酶1.5～2.Oml，充分吹打、混匀消化液与离心液，置37℃振动水浴中消化20分钟，1500r/min离心5分钟，弃上清液，加入5ml含有10％新生小牛血清的RPMI 1640培养液，充分吹打混匀后，移入培养瓶中，37℃, 5%