分子克隆及细胞培养基本实验方法收集.pdfVIP

分子克隆及细胞培养基本实验方法 1.载体构建实用操作技术 1.1 菌种的保存— 20% 甘油菌 2 体积菌液与 1 体积 70% 的甘油混合后，储存于 -20 ℃或 -70 ℃备用。 （甘油菌中甘 油的浓度为 20-30% 均可） 1.2 甘油菌复苏、培养 方法一、挑取甘油菌一环，接种在含 100ug/ml Amp 的 LB 固体培养基上 （活化菌 种），37℃培养过夜 （约16 小时）；挑取一个菌落转接在含 100ug/ml Amp 的 LB 液体培养基中， 37℃振荡过夜（约 12~16 小时）。 方法二、 直接吸取 10~20ul 甘油菌，接种在含 100ug/ml Amp 的 LB 液体培养基中， 37℃振荡过夜（约 12~16 小时）。 1.3 小规模制备质粒 DNA （QIA miniprep kit ） 适于从 1~5ml 菌液中制备 20ug 高拷贝