基因工程制药 (6).pptVIP

（二）影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素 ⑴外源基因的剂量 外源基因拷贝到高拷贝数的表达质粒上，总体表达水平提高 ⑵ 外源基因的表达效率 与启动子强弱，核糖体结合位点的有效性，SD序列与起始密码的间距，密码子的组成等都影响其表达效率 第三十页，共51页 ⑶ 表达产物的稳定性 ⑷细胞代谢负荷 宿主细胞的生长与重组质粒的复制分开 细胞的生长和外源基因的表达分成两个阶段 ⑸工程菌的培养条件 优化工程菌培养条件，提高基因表达水平 第三十一页，共51页 （三）真核基因在大肠杆菌中的表达形式 ⑴以融合蛋白的形式表达药物基因 以原核多肽和真核蛋白结合在一起称融合蛋白。 优点：操作简便，表达蛋白在菌体内稳定，易实现高效表达； 缺点：只能作抗原用。 第三十二页，共51页 ⑵ 以非融合蛋白的形式表达药物基因 非融合蛋白指在大肠杆菌中表达的蛋白质以真核蛋白的mRNA的AUG为起始，在其氨基端不含细菌多肽序列。 优点：保持原有蛋白活性； 缺点：易被蛋白酶破坏。 第三十三页，共51页 ⑶分泌型表达蛋白药物基因 优点：在周质中稳定，有活性，不含 蛋氨酸残基； 缺点：产量不高， 信号肽不被切割。 第三十四页，共51页 三、酵母中的基因表达 （一）表达载体 酵母载体是可以携带外源基因在酵母细胞内保存和复制，并随酵母分裂传递到子代细胞的DNA或RNA