阻断肾素血管紧张素系统对糖尿病大鼠肾脏血管紧张素ⅡAT1受体的影响临床医学.docVIP

阻断肾素血管紧张素系统对糖尿病大鼠肾脏血管紧张素ⅡAT1受体的影响临床医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：阻断肾素血管紧张素系统对糖尿病大鼠肾脏血管紧张素ⅡAT1受体的影响临床医学 1 1 材料和方法 2 2 结 果 4 3 讨 论 5 文2：肾素血管紧张素系统与肾脏固有细胞表型转化的关系临床医学 7 1 肾脏固有细胞的表型转化 8 2 RAS与细胞表型转化关系的研究 9 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 11 正文 阻断肾素血管紧张素系统对糖尿病大鼠肾脏血管紧张素ⅡAT1受体的影响临床医学 文1：阻断肾素血管紧张素系统对糖尿病大鼠肾脏血管紧张素ⅡAT1受体的影响临床医学 糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）的发病机制尚未完全阐明。多方面研究揭示，肾素.血管紧张素系统（RAS）在DN的发病机制中起着非常重要的作用［1，2］ 。一般认为，RAS可以分为循环RAS和局部RAS两个既有区别又密切联系的部分。在糖尿病状态下，循环RAS和肾脏局部RAS活性的高低及动态变化等可能是不同甚至是相反的。血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）作为RAS的最主要组分，其生物活性主要通过其AT1受体发挥作用［3］ 。肾脏AT1受体的表达可间接反映局部RAS的活性。对于糖尿病状态下肾脏局部RAS的调节状况目前尚存很多争议，各研究结果也时有分歧。本研究通过检测AT1受体在糖尿病大鼠肾脏各部位的表达，观察此时局部RAS的活性变化，并探讨通过用血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）福辛普利和AngⅡ受体拮抗剂（ARB）伊贝沙坦，阻断RAS后对AT1受体表达的影响。 1 材料和方法 实验动物及分组 200～240g雄性SD大鼠，购自并饲养于复旦大学医学院实验动物中心（清洁级环境）。环境温度维持在（20±2）℃。大鼠进食标准饮食，自由饮水。所有大鼠随机分为5组，每组6只:糖尿病对照组（diabetic control group，DC组），伊贝沙坦组（irbesartan group，Ⅰ组），福辛普利组（fosinopril group，F组），伊贝沙坦与福辛普利合用组（irbesartan plus fosinopril group，IF组），正常对照组（normal control group，NC组） 糖尿病动物模型制作 除正常对照组大鼠外，其余大鼠按55mg#12539;kg-1 体重一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ，Sigma公司），48h后尾静脉采血，用快速血糖仪［one TouchⅡ型，强生（ 中国 ）有限公司］测定全血血糖，血糖#12539;L-1 同时用尿糖试纸测定尿糖+++～++++者确定为糖尿病大鼠。成模后稳定4～5d开始用药干预，伊贝沙坦和福辛普利溶解于磷酸盐缓冲液中制成7mg#12539;ml-1 的溶液（），每日1次灌胃给药，剂量:伊贝沙坦组和福辛普利组均为40mg#12539;kg-1 #12539;d-1 ;合用 组为两药各20mg#12539;kg-1 #12539;d-1 ;对照组仅给予等量磷酸盐缓冲液灌服。观察时间为4周。整个实验期间不使用胰岛素。 标本制备 实验第4周末，大鼠空腹16h后在3%水合氯醛1ml#12539;（100g）-1 腹腔注射麻醉下行腹主动脉插管，收集2ml全血，注入预冷的含20μl EDTA的离心管，4℃离心（1500r#12539;min-1 ）5min分离血浆。取1ml血浆，放入另一管已预冷的含有10μl酶抑制剂1和20μl酶抑制剂2（试剂盒中提供）的试管中摇匀，置于-20℃冰箱保存，待测AngⅡ。其余血标本待作生化检测。取血毕，经腹主动脉注入4℃预冷的生理盐水反复灌洗至肾脏转为苍白，分离肾脏，截取厚度2mm左右的一片肾组织置于4%的中性甲醛缓冲液中固定。其余肾组织于液氮中暂存。 实验方法 血糖测定 由日立7170型全自动生化分析仪测得。 血浆AngⅡ水平测定 采用放射免疫法（试剂盒购自中国原子能 科学 研究院）测定。 免疫组织化学法检测肾脏AT1受体表达 肾组织标本固定48h，石蜡包埋，切成4μm厚切片，常规脱蜡至水，%H2 O2 .甲醇处理，加一抗1∶100兔抗大鼠AT1抗体（Santa Cruz公司），4℃过夜，加二抗.HRP复合物（Antibody Diagnostica Inc.）于37℃孵育30min，DAB（Antibody Diagnostica Inc.）显色4min，苏木素复染。阳性组织呈棕黄色，而阴性部分呈蓝色。 Western blot法检测肾脏AT1受体蛋白表达 肾组织加入细胞裂解液匀浆，采用改良Lowry法测定蛋白浓度。