奥曲肽联合特异性COX2抑制剂对肝癌细胞的抑制作用.docVIP

奥曲肽联合特异性COX2抑制剂对肝癌细胞的抑制作用 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：奥曲肽联合特异性COX2抑制剂对肝癌细胞的抑制作用 1 1 材料与方法 2 2 结 果 4 3 讨 论 5 文2：中华大蟾蜍抗菌肽对癌细胞的生长抑制作用 8 1 材料与方法 8 2 结果 11 3 讨论 12 参考文摘引言： 13 原创性声明（模板） 14 文章致谢（模板） 14 正文 奥曲肽联合特异性COX2抑制剂对肝癌细胞的抑制作用 文1：奥曲肽联合特异性COX2抑制剂对肝癌细胞的抑制作用 对失去手术机会根治无望的原发性肝癌（primary hepatic carcinoma，PHC）目前尚缺乏有效的 治疗 手段。近年来国内外研究表明，非细胞毒性药物可抑制肿瘤的生长甚至转移，不良反应较轻。这类药物主要包括生长因子、激素、激素拮抗剂及环氧化酶.2（）抑制剂等［1～3］ 。鉴于肝癌的发生和 发展 的多因素性和多环节性［4］ ，联合用药方案成为大多数学者的选择。由于生长抑素类似物奥曲肽和特异性抑制剂的抗肿瘤机制不同，因此本研究通过肝癌细胞体外培养，采用四氮唑盐（MTT）比色法（MTT法）、流式细胞仪检测等方法，来观察奥曲肽联合特异性抑制剂.398对肝癌细胞生长有无协同抑制作用，为联合应用.398和奥曲肽治疗肝癌提供实验依据。 1 材料与方法 材料 细胞系来源 人肝癌细胞系为东南大学遗传中心实验室所赠。 主要试剂 .398（美国Cayman公司），奥曲肽（瑞士诺华公司），RPMI Medium1640（美国Gibco公司），HEPES、小牛血清、胰蛋白酶、MTT（Amresco公司），AnnexinⅤ.FITC试剂盒（Gender公司） 实验方法 细胞培养 肝癌细胞常规培养于含有10%小牛血清、100U#12539;ml-1 青霉素、100U#12539;ml-1 链霉素的RPMI1640培养液中，吹打细胞使之悬浮并接种到培养瓶中，37℃、CO2 体积分数为、饱和湿度条件下培养。每2～3d用%胰蛋白酶消化传代。 MTT法 实验先设空白组［仅含培养液和等体积的二甲亚砜（DMSO）］、对照组（细胞的单细胞悬液200μl加等体积的DMSO）及实验组（细胞的单细胞悬液200μl加药物100μl）。实验组又分为.398、奥曲肽的不同浓度梯度组，其中.398为5个浓度梯度（1×10 -8 ～1×10-4 mol#12539;L-1 ），奥曲肽也为5个浓度梯度（1×10-9 ～1×10-5 mol#12539;L-1 ），每组设4个复孔。取对数生长期的细胞制成单细胞悬液，调整细胞浓度为5×104 ml-1 ，接种于96孔培养板内（200μl#12539;孔-1 ）培养24h，加入不同浓度的药物100μl，分别培养12、24、48及72h，然后每孔加入MTT液20μl（5mg#12539;ml-1 ），继续培养4h，吸去上清液，每孔加入DMSO150μl终止反应，将96孔板移入平板震荡器，水平震荡10min，使MTT还原产物完全溶解，用型酶联免疫检测仪于570nm波长处 测定每孔吸光度（A）值，结果以每组4个孔的ˉx±s表示，实验重复3次。由以上实验得出奥曲肽在1×10-6 mol#12539;L-1 作用72h抑制率为%，.398于1×10-5 mol#12539;L-1 作用72h抑制率为%，都接近半数抑制量，故以下实验选择1×10-6 mol#12539;L-1 奥曲肽联合1×10-5 mol#12539;L -1 .398作用于细胞72h，初步观察两药的相互作用。 流式细胞仪检测细胞凋亡情况 收集.398、奥曲肽单用及联合应用24h后的细胞×106 ml-1 ，PBS洗涤后用消化液消化成单细胞悬液，取1ml细胞，1000r#12539;min-1 、4℃离心10min，弃上清，加入1ml冷的PBS，轻轻震荡使细胞悬浮，1000r#12539;min-1 、4℃离心10min，弃上清，重复用冷的PBS洗两次，将细胞重悬于200μl Binding Buffer，加入10μl An-nexin 和5μl碘化丙啶轻轻混匀，避光室温反应15min或4℃反应30min，加入300μl Binding Buffer，在1h内上机检测细胞的凋亡率。 药物相互作用结果判断 用金正均方法［5］ ，在量效曲线线性区内，两药合并用药的抑制率及两个单用药的抑制率用如下公式 计算 q值:q=两药合用的抑制率.两单药预计抑制率=EA+B .EA +（1-EA ）×EB 。当q=±时，两药有相加作用;q时，两药有协同作用;当q时，两药有拮抗作用。 统计学处理 MTT法和流