肝胆疾病生物化学检验PPT课件.ppt

速率法测定血清γ-谷氨酰基转移酶 GGT催化γ-谷氨酰基移换反应。以L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺为底物，双甘肽为谷氨酰基的受体，在GGT的催化下，谷氨酰基转移到双甘肽分子上，同时释放出黄色的2-硝基-5-氨基苯甲酸，根据405nm处吸光度增加的速率（△A/min）推算出GGT活性单位 原理： * 计算： 参考范围：男性 11～50U/L （37℃），女性 7～32U/L（37℃） ` 方法评价: 本法准确度好；精密度好线性范围宽（460U/L）；操作 简便；但对试剂纯度要求高 * 二、γ-谷氨酰转肽酶测定的意义 分布：肾最高，其次是前列腺、胰、肝等器官 尿中GGT活性： 可能有助于诊断肾疾病 血清GGT用于诊断肝胆疾病 1. 原发性或转移性肝癌 2. 阻塞性黄疸 3. 病毒性肝炎和肝硬化 4. 乙醇性肝炎 * 五 血清胆红素测定 一、测定方法简介 总胆红素 未结合胆红素 结合胆红素 δ胆红素 （共价结合白蛋白） 重氮法 改良J-G法 胆红素氧化酶（bilirubin oxidase，BOD）法 测定方法: * （一）重氮法 结合胆红素能与重氮试剂直接反应生成紫红色的偶氮化合物（λ=560nm） 未结合胆红素需加入甲醇、乙醇、苯甲酸钠、尿素等“加速剂”，破坏分子内氢键，才能与重氮试剂反应生成紫红色的偶氮化合物 结合胆红素 + 原理： * 血清与醋酸钠-咖啡因-苯甲酸钠试剂（咖啡因试剂）混合后，加入氯化重氮苯磺酸（重氮试剂），生成紫红色偶氮胆红素，最后加入强碱性酒石酸钠溶液，使颜色不稳定的紫红色偶氮胆红素在咖啡因存在下转化为稳定的蓝色偶氮胆红素。反应结束后，在600nm波长比色，从校准曲线查找总胆红素和结合胆红素含量 醋酸钠缓冲液保持偶氮反应的pH； 咖啡因试剂促进未结合胆红素分子内的氢键破坏，加速与重氮试剂的偶联反应； 叠氮钠（或抗坏血酸）可终止结合胆红素的偶氮反应。 （二）改良J-G法(加速剂为苯甲酸钠-咖啡因) 原理： * 成因 胆红素摄取障碍 胆红素结合障碍 胆红素转运障碍 胆红素排泄障碍 （2）肝细胞处理能力下降--肝细胞性黄疸 临床上可见于新生儿生理性黄疸，肝内胆汁淤滞、感染、化学试剂、毒物、肿瘤等导致的肝病以及先天性遗传缺陷如Gilbert综合征、Crigler-Najjar综合征等。 * * 代谢特点 血中两种胆红素含量都增高。总胆红素升高，结合胆 红素占总胆红素的35%以上。 结合胆红素可由肾小球滤过，尿中出现胆红素。 结合胆红素在肝内生成减少，粪便颜色变浅。 尿中胆素原含量变化不定。一方面是从肠吸收的胆素原 不能有效地随胆汁排出，使血中胆素原增加，尿中胆 素原增加；另一方面是肝实质性损伤及炎症、肿胀等 造成肝、胆管阻塞，结合胆红素不能排入肠道，尿中 胆素原减少。 ------高未结合和结合胆红素血症 * * （3）胆红素排泄障碍---阻塞性黄疸 成因 胆道梗阻致胆红素排泄 障碍。如胆结石、胆道 蛔虫或肿瘤压迫以及 Dubin-Johnson综合征 等所致的胆道梗阻 * * 代谢特点 血中结合胆红素含量增高，总胆红素升高，结合胆红 素占总胆红素的50%以上。 结合胆红素能被肾小球滤过，尿中出现胆红素。 胆红素不易或不能随胆汁排入肠道，因而肠腔胆素原 很少或缺失，粪便颜色变浅或呈灰白色。 尿中排出的胆素原也相应变少，胆红素阳性。 ------高结合胆红素血症 * * 新生儿生理性黄疸的成因（icterus neonatorum） 生下后，血液内原来过多的红细胞被破坏，未结合胆红素生成过多。 肝细胞内载体蛋白—Y蛋白少，肝细胞摄取未结合胆红素的能力不足。 肝细胞内胆红素葡萄糖醛酸基转移酶生成不足，结合胆红素生成少。 肝细胞胆汁分泌器发育不完善，对肝胆汁分泌的潜力不大。 母乳中含有孕二醇，对葡萄糖醛酸基转移酶有抑制作用。 * * 4）黄疸的实验室检查 胆红素代谢实验 * * 三种类型黄疸的实验室鉴别诊断 * * （六）胆汁酸