紫外可见吸收光谱法（课堂PPT）.pptVIP

第三章 紫外-可见吸收光谱法（UV-Vis）;可见光;1. 物质分子对光的吸收;三、紫外-可见吸收光谱 法;1. 精密度较高;五、研究工作的现状;第二节 吸收光谱法基本原理;; 当溶液中的某种物质选择性地吸收可见光中某种颜色的光时，溶液就会呈现出对应的互补色。 ;二、吸收光谱;末端吸收;1. 吸收峰的形状及所在位置 ——定性的依据 2. 吸收峰的强度——定量的依据 光吸收定律;三、光吸收定律;I0;吸光度 与透光率;3. 吸光度的加合性;C: mol/ L;3) 检出限与摩尔吸光系数;(二) 导致 A-C 关系偏离朗伯－比尔定律的原因;;2. 非平行入射光引起的偏离，光程的变化引起信号的变化; 浓度增高，吸光物质粒子平均距离减小，相互作用增强，电荷分布改变， ε改变。 ε减小，向浓度轴偏离； ε增大，向吸光度轴偏离。;一、有机物的紫外可见吸收光谱;; ;2. 生色团的共轭作用; 一些含有n电子的基团 －OH －NH2 －X; （ 四 ）溶剂效应;1. d－d 配位场跃迁;2.电荷转移跃迁;3. 中心离子影响下配位体 的?-?* 跃迁;一、比色法 1. 目视比色法 用眼睛观察比较溶液颜色以确定物质含量 原理： 间接应用比尔定律（观测吸收光的互补色光） 仪器：比色管 方法：标准系列法 特点：简单 准确度不高;2. 光电比色法;二、分光光度法;;1.光源;光电倍增管（PMT）;;（二）双光束分光光度计;仪器实物;仪器实物1;第五节 分析条件的选择;显色反应基本要求;（二）显色条件的选择;RH = R- + H+ ;3. 显色温度;（二）测量条件的选择;当T = 0.368 = 36.8 %时，仪器测量误差最小;3.参比液的选择;第六节 吸光光度法的应用;二、定量分析;例： 人血清中总蛋白的测定。在碱性溶液中，蛋白质分子中多肽的肽键可与铜离子作用生成紫红色络合物。在37℃下，反应15min，一个铜离子可与6个肽键形成配位键，不同种类蛋白的显色能力相似。在540 nm测定所形成络合物的吸光度，可以对人血清中总蛋白含量进行测定。 葡萄糖在葡萄糖氧化酶(GOD）作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢,后者与酚及4-氨基安替吡啉在过氧化物酶(POD) 作用下生成红色醌类染料化合物，在500 nm 波长处检测，可测定人血清或血浆中的葡萄糖含量。 H2O2 + 4-氨基安替吡啉 + 对氯苯酚 过氧化物酶 醌染料 + H2O ;甘油三脂的测定： 甘油三脂 + H2O 脂肪酶 甘油 + 脂肪酸 甘油 + ATP 甘油激酶 甘油-3-磷酸 + ADP 甘油-3-磷酸 + O2 甘油磷酸氧化酶 磷酸二羟丙酮 + H2O2 H2O2 + 4-氨基安替吡啉 + 对氯苯酚 过氧化物酶 醌染料 + H2O 在500 nm 波长处检测，可测定人血清中的甘油三脂含量 ;2. 双波长法;3.示差光度法;**示差法提高准确度的实质;（二）多组分的测定;三、 络合物的组成的测定;M + nR = MRn;四、络合物条件稳定常数的测定;五.弱酸弱碱离解常数的测定;△E = △ Ee + △ Ev + △ Er;四、导致A-C关系偏离朗伯－比尔定律的原因;五、 分析条件的选择;六、测量条件的选择（减小测量误差 ）;;（二）双光束分光光度计;波长组合的选择;九、定性分析;练习与思考作业题 1. P137: 2，3，6，7，9，10，11 2. 简述朗伯—比尔定律成立的前提条件及物理意义,写出其数学表达式。 3. 摩尔吸收系数ε 在光度分析中有什么意义? 如何求出ε 值？ ε 值受哪些因素的影响？ 4. 在光度法测定中引起偏离朗伯—比尔定律的主要因素有哪些？ 如何消除这些因素的影响？ 5. 为了提高测量结果的准确度,应该从哪些方面选择或控制光度测量的条件？ 6. 测量吸光度时，如何选择入射光波长？ 如何选择参比溶液？ 7. 浓度为25.5 μg/50 mL的Cu2+ 溶液，用双环已酮草酰二腙光度法进行测定，于波长600nm处用2 cm吸收池进行测量，测得T = 50.5％，求吸收系数a 、摩尔吸收系数ε和桑德尔灵敏度S 。;8．用硅钼蓝分光光度法测定钢中硅的含量。用下列数据绘制校准曲线: 硅标准溶液浓度/mg·m