[生物技术概论]植物细胞工程及其应用.pdf

第三章 细胞工程 第二节细胞工程基本技术 一、细胞培养技术 细胞培养是细胞工程中的一项重要技术， 各种生物技术无不与细胞培养有关。 指动，植物，微生物细胞在体外条件下 的保存和生长，在培养的过程中不再形 成组织。 操作步骤： 取材与除菌 配置细胞培养基，并且将生物材料接种 于培养基中 将接种后的培养基放置到培养室或培养 箱中培养。 1）植物细胞和组织培养技术 ①从健康植株的特定部位或组织，如根、茎、叶、花、果实、胚珠、 花药和花粉等，选择用于组织培养的起始材料，称之为外植体。 ②用一定的化学药剂，最常用的有次氯酸钠，升汞和酒精等对外植体 表面消毒，建立无菌培养体系。严格控制无菌条件，这是获得培养成 功的重要一步。 ②外植体块在培养基上形成疏松的愈伤组织，由愈伤组织分化出芽并 可诱导形成根的小植株。 2）动物细胞和组织培养技术 二、细胞融合技术 细胞融合技术又叫体细胞杂交，指采用 人工或自然的方法使两个或两个以上的 不同细胞（或原生质体）融合为一个细 胞，不经过有性过程而得到杂种细胞的 方法。 操作过程：制备原生质体 诱导细胞融合 筛选杂合细胞 三、细胞拆合技术 细胞拆合技术又称细胞重组技术，指从活细胞 中分离出细胞器及其组分，然后将不同细胞来 源的细胞器在体外一定条件下进行重组，使其 重新装配成具有生物活性的细胞或细胞器的一 种试验技术。 细胞拆合的方式基本分为以下3种； (一)胞质体与完整细胞重组形成胞质杂种。 (二)微胞体与完整细胞重组形成微细胞异核体。 (三)胞质体与核体重新组合形成重组细胞。 细胞拆合包括核移植和细胞器移植。 细胞核移植 细胞器移植技术 ➢ 277次乳腺细胞核移植 实验； ➢ 获得29个发育为8细胞 的 “胚”； ➢ 13头代孕母亲； ➢ 1996年7月5 日，羊羔 6LL3，被命名为 “多莉 ”。 预想的克隆人技术路线 四、染色体工程技术 染色体工程是按人们的需要来添加、削减或替换 生物的染色体的一种技术。 主要分为动物染色体工程和植物染色体工程 五、胚胎工程技术 现代动物胚胎工程的概念涵盖所有对动物配 子和胚胎进行工程化操作的技术方法， 主要分为四大类技术体系： 第一类是胚胎移植相关技术，包括超数排卵 与胚胎移植(multiple ovulation and embyo transfer，MOET)技术、胚胎体外生产技术、 胚胎移植前性别鉴定技术与动物性别控制技 术、卵母细胞与胚胎的冷冻保存技术； 第二类为动物克隆技术，包括胚胎分割技术、 细胞核移植技术和胚胎嵌合技术体系； 第三类为转基因动物技术； 第四类为胚胎干细胞技术。 。 第三节植物细胞工程 （plant cell engineering ） 几个基本概念 植物组织培养 植物细胞培养 原生质体培养与体细胞杂交 单倍体育种 人工种子 一、几个基本概念 全能细胞（totipotential cells ）：能够表 达生物体基因组的任何一种基因，并能 分泌出该物体内任何一种细胞，并进而 发育成为一个完全相同的的生物体的细 胞。 外植体（explant ）：指植物组织培养过 程中用来进行无菌培养的离体材料，可 以是器官，组织，细胞和原生质体。 原生质体（trophoplast ）：指除去全部 细胞壁的细胞，仅有细胞膜包裹，呈圆 形，要在高渗液中才能维持细胞的相对 稳定。 胚状体（embryoid ）：组织培养中起源 于非合子细胞，经过胚胎发生于胚胎发 育而形成的胚状结构。 继代培养（successive transfer culture ）： 指遇伤组织在培养基上生长一段时间后， 由于营养缺乏，水分散失，代谢产物积 累等原因，需将这些组织转移到新的培 养基上，这种转移就叫做继代培养或传 代培养。 愈伤组织 （callus ）原指植物体的局