原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
在分子克隆实验中，有时我们会在待扩增的目的基因片段两端加上特定的酶切位点，用
于后续的酶切和连接反应。由于直接暴露在末端的酶切位点不容易直接被限制性核酸内切酶
切开，因此在设计 PCR引物时，人为的在酶切位点序列的 5 ‘端外侧添加额外的碱基序列，
即保护碱基，用来提高将来酶切时的活性。
添加保护碱基，需要考虑两个因素：一是碱基数目，一是碱基种类。
添加保护碱基时，最关心的应该是保护碱基的数目，而不是种类。什么样的酶切位点，
添加几个保护碱基，是有数据可以参考的，见附表。
添加什么保护碱基，如果严格点，是根据两条引物的 Tm值和各引物的碱基分布及 GC含
量。如果某条引物 Tm值偏小， GC%较低，添加时多加 G或 C，反之亦反。
保护碱基列表
Chain % Cleavage
Enzyme Oligo Sequence
Length 2 hr 20 hr
GGTCGAC C 8 0 0
AccI CG GTCGAC CG 10 0 0
CCG GTCGAC CGG 12 0 0
CACATGT G 8 0 0
AflIII CC ACATGT GG 10 90 90
CCC ACATGT GGG 12 90 90
GGCGCGCC 8 90 90
AscI A GGCGCGCC T 10 90 90
TT GGCGCGCC AA 12 90 90
CCCCGGG G 8 50 90
AvaI CC CCCGGG GG 10 90 90
TCC CCCGGG GGA 12 90 90
CGGATCC G 8 10 25
BamHI CG GGATCC CG 10 90 90
CGC GGATCC GCG 12 90 90
CAGATCT G 8 0 0
BglII GA AGATCT TC 10 75 90
GGA AGATCT TCC 12 25 90
文档评论（0）