河南农大植物生理学试验四选一.pdfVIP

一、叶绿素的提取、分离与含量测定 一、实验原理 根据叶绿体提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其消光度， 即可用公式计算出提取液中各色素的含量 根据朗伯-比尔定律，某有色溶液的消光度A 与其中溶质浓度C 和液层厚度 L 成正比，即： A=aCL 式中：a 为比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度1cm 时，a 为该物质 的吸光系数 各种有色物质溶液在不同波长下的吸收系数可通过测定已知浓度的纯净物在不同波长下 的吸光的而求得 如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各 组分在相应波长下吸光度的总和，这就是吸光度的加和性 欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b 的含量，只需测定该提取液在两个特定波长 下的吸光度A，饼根据叶绿素 a、b 在该波长下的吸光系数即可求出其浓度 在测定叶绿素 a、 b 时，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰 二、实验步骤 1、取新鲜植物叶片（或其他绿色组织），擦净组织表面污物，剪掉（去掉叶脉），混匀 2、称取剪碎的新鲜样品0.2g 一份，放入研钵中，加入2—3ml95%乙醇研成匀浆，再加乙 醇 10ml，继续研磨至组织变白。静置3-5min 3、取25ml 容量瓶 1 支，沿玻璃棒把提取液通过漏斗倒入容量瓶内，用少量乙醇冲洗研钵、 研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中，定容，为待测液 4、取洁净的试管 1 支，将待测液过滤于试管中 5、把叶绿体色素提取液倒入光径1cm 比色杯中 以95%乙醇为空白，在波长 665nm、649nm 下测定吸光度 二、根系活力的测定——甲烯蓝法 一、实验目的 植物根系是活跃的吸收器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部分的生长、营养状 况及产量水平。本实验联系测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据 二、实验原理 根据沙比宁等人理论，植物对溶质的最初吸收具有吸附性的特性，并假定这时在根系表面 均匀地覆盖了一层被吸附物质的单分子层，而后在根系表面产生吸附饱和，继之根系的活跃 部分讲原来吸附着的物质解吸附到细胞中去，继续产生吸附作用 常用甲烯蓝作为被吸附物质，它的被吸附量可以根据吸附前后甲烯蓝浓度的改变算出，甲 烯蓝浓度可用比色测定 已知1mg 甲烯蓝成单分子层时占有的面积为1.1 ㎡ 据此可算出根 系的活跃吸收表面积，可作为根系活力的指标 三、实验步骤 1、甲烯蓝溶液标准曲线的制作（每班选两组做标准曲线） 取试管 7 支编号，按下表次序加入各溶液，即成甲烯蓝标准溶液 表 各试剂加入顺序 试管号 1 2 3 4 5 6 7 0.01mg/ml 甲烯蓝溶液（ml） 0 1 2 4 6 8 10 蒸馏水（ml） 10 9 8 6 4 2 0 甲烯蓝浓度（mg/ml） 0 0.001 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 光密度值 以第一管（水）为对照在波长为660nm下比色，读出光密度值，以甲烯蓝浓度为横坐标，光 密度值为纵坐标绘成标准曲线。 2、样品测定：取烧杯两只，每只加入0.0002mol/L 甲烯蓝溶液20ml，编号分别为1号杯 和2号杯。将冲洗干净的待测根系，用吸水纸小心吸干（切勿伤根），然后依次浸入盛有甲 烯蓝溶液的烧杯中，在1号杯中浸3min，时间到后取出在放入2号杯，时间为1.5min，注 意：每次取出时都要使甲烯蓝溶液能从根上刘流回到原杯中去。 3、测定根系体积：用排水法测定 4、查标准曲线： 从两个烧杯中各吸取甲烯蓝溶液1ml于两支试管中，各管加水9ml，即稀释10倍。然后 在波长660nm 以水为对照进行比色，测定光密度值OD，查标准曲线或代入回归方程可计算 出溶液浓度（记为C1、C2）。 三、植物水势的测定（小液流法） 一、实验原理 将植物组织分别放在一系列浓度递增的溶液中。当找到某一浓度的溶液与植物组织之间 水分保持动态平衡时