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动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数 4、血涂片染色 先将干燥血片用甲醇固定3-5分钟，将固定的血片置于被pH 6.4-6.8磷酸盐缓冲液稀释10-20倍的吉姆萨染液中，浸染5分钟（标本较少可用滴染法），取出用蒸馏水冲洗，再用伊红复染1分钟，用蒸馏水冲洗，待干后镜检。 动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数 冲洗后滴加少量伊红，染色1分钟 直接流水冲洗1分钟 （切勿先倒掉染液） 涂片经水洗干燥后镜检 涂片干燥后加吉姆萨染液染色5分钟 动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数 二、血细胞计数 血细胞计数板的结构 XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格。0.1mm为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2 ，分为400个小格，每小格面积是1/400mm2。 动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数 动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数 1、血液稀释 用10微升移液枪取10微升血液于一新的1.5mL离心管中，再用1000微升移液枪吸990微升生理盐水于离心管中（稀释100倍），轻轻颠倒混匀。 2、计数板处理 用无水乙醇或95%乙醇溶液擦拭计数板后，用绸布擦净，另擦净盖玻片一张，把盖片覆在计数板上面。 3、充液 取干净的计数板平放于实验桌上，将盖玻片置入计数板正中央。用毛细血管吸取已稀释混匀后的血细胞悬浮液，并将管尖轻轻斜置于盖玻片边缘，让血细胞悬液缓慢流出，借毛细管现象而自动流入计数室内。 动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数 动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数 4、静置 血细胞悬液充入计数室后，静置2～3分钟，待细胞不再浮动后，于低倍镜下观察计数室内待计数的血细胞分布是否均匀，分布均匀者，方可计数。 动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数 5、按图计算计数板的四角大方格（每个大方格又分16个小方格）内的细胞数。计数时，只计数完整的细胞，若聚成一团的细胞则按一个细胞进行计数。在一个大方格中，如果有细胞位于线上，一般计下线细胞不计上线细胞，计左线细胞不计右线细胞。 动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数 6、计算 计完数后，需换算出每ml悬液中的细胞数。由于计数板中每一方格的面积为0.01 cm2，高为0.01 cm，这样它的体积为0.0001 cm3，即0.1 mm3。由于1 ml＝1000 mm3，所以每一大方格内细胞数×10000＝细胞数/ml，故可按下式计算： 细胞悬液细胞数/ml＝4个大格细胞总数/4×10 000? 如计数前已稀释，可再乘稀释倍数。 动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数 血细胞计数换算公式： 16×25：计数个数×400×10000÷100×稀释倍数 （单位：个/ml） 25×16：计数个数×400×10000÷80×稀释倍数 （单位：个/ml） 动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数 动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数 4．移液枪的使用要按规定使用，使用时不要过力按压移液枪，用完后要将量程回到移液枪的最大量程处。 5．镜下计数时，若方格中细胞分布明显不均，说明细胞悬液混合不均匀，需重新将细胞悬液进行混合，再重新计数。 6．盖玻片及计数板用过之后，必须立即用水冲洗，但不可用硬物刷洗。计数板晾干或吹风机吹干后，应镜检计数室是否干净，如不干净必须重复洗至干净为止。 动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数 动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数 动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数 血液：是一种由血浆和血细胞组成的流体组织，由心脏搏动推动在心血管系统中不断循环流动，具有运输、防御和免疫、维持内环境的相对稳定和参与体液调节等多种功能。 动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数 血液具有维持生物体内环境稳态的作用，正常情况下血液中的的各项生理指标处于相对稳定的状态，同时各项指标也能够反映一个生物个体的健康程度，因而血液检测已成为疾病检测最基本的技术。 多种多样的血液检测仪 动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数 血液检测能够辅助疾病诊断 动物生理学实验三 鱼类血液涂片制作与血细胞计数 血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法，也是生物显微制片的基本方法之一，临床上应用极为广泛，特别是对于各