dna克隆技术专题知识正式版.ppt

抗Amp 宿主细菌 含Amp培养基 标志补救（?-半乳糖苷酶法） lacZ Am N2H ?片段 COOH ?片段 X-gal Lac Z 蓝色化合物 X-gal （LacZ基因 N端序列） 插入片段 （LacZ基因失活） LacZ基因 C端序列 LacZ酶 克隆载体(cloning vector) 为使插入 外源DNA序列被扩增而特意设计 载体称为克隆载体。 表示载体(expression vector) 为使插入 外源DNA序列可转录翻译成多肽链而特意设计 载体称为表示载体。 酵母人工染色体 (yeast artificial chromosome, YAC) 细菌人工染色体 (bacterial artificial chromosome, BAC) 动物病毒DNA改造 载体 （如腺病毒, 腺病毒相关病毒, 逆转录病毒） 其她载体 四 限制性内切酶剪切目 基因与载体 切 酶切 Bam HⅠ切割反应 GGATCC CCTAGG T4 DNA连接酶 15oC GATCC G G CCTAG + 目的基因用 Bam HⅠ切割 载体DNA用Bam HⅠ切割 重组体 载体自连 目的基因自连 同一限制酶切位点连接 目 录 不一样限制酶切位点（非配伍末端） 连接 Eco RⅠ切割位点 Bg lⅡ切割位点 + EcoRⅠ+ B