柯萨奇病毒A10型空心病毒的单克隆抗体及其应用发明专利.docxVIP

柯萨奇病毒A10型空心病毒的单克隆抗体及其应用 技术领域 本发明涉及免疫学技术领域，具体涉及柯萨奇病毒A10型空心病毒的单克隆抗体及其应用。 背景技术 手足口病是由多种肠道病毒感染引起的急性传染病，夏季流行，学龄前儿童高发，成人可为间接传染源。手足口病临床主要表现为口腔、手、足部位皮疹，可并发脑膜炎、脑炎、肺水肿、循环衰竭等导致死亡的重症。目前肠道病毒71型(enterovirus 71，EV71)和柯萨奇病毒A16(coxsackievirus，CA16)是中国大陆地区引起手足口病最常见的病原体。但随着检测技术及病毒分型手段的进步，近年来发现肠道病毒中的柯萨奇病毒A6(coxsackievirus，CA6)和柯萨奇病毒A10(coxsackievirus，CA10)的流行率呈现逐年增高的趋势，并成为部分地区的主要流行血清型。针对近几年病毒血清型的流行趋势，国内外众多研究机构及企业均在着力开发能够有效预防由CA6或CA10引起的手足口疾病发生的疫苗或药物。 临床治疗方面为能提供最快速的方案，通常需要一种快速的检测方法，ELISA快速检测试剂盒是最常用的方法，能够在最短的时间内检测出患者所感染的病毒血清型。筛选一株型别特异性的单克隆抗体是建立检测试剂盒的前提。此外，在疫苗的研究过程中，疫苗中抗原含量是指导工艺研究和评价体外有效性的关键指标。建立抗原评价方法最关键的技术也在于筛选到合适的单克隆抗体，继而可利用该单克隆抗体建立一套有效的ELISA评价系统。 柯萨奇病毒A6(coxsackievirus，CA6)和柯萨奇病毒A10(coxsackievirus，CA10)均为肠道病毒，肠道病毒在体外培养时容易形成两种不同的结构状态，一种为包含核酸的完整实心病毒颗粒，一种为不含核酸的空心病毒颗粒，通常这两种状态的病毒颗粒是共同存在的。经文献资料记载及多次的实验研究表明，实心病毒颗粒和空心病毒颗粒均有免疫原性，但实心病毒颗粒明显强于空心病毒颗粒。病毒原液中若含有一定比例的空心病毒颗粒，可有效提高原液总蛋白含量，对病毒原液及成品疫苗的稳定性具有重要的意义。因此，在疫苗的工艺研究和制剂研究中，能够确定产品中实心病毒颗粒和空心病毒颗粒的比例对产品的质量评价具有重要意义。分别建立能够检测实心病毒颗粒的抗原评价系统及检测空心病毒颗粒的抗原评价系统将对病毒原液的监测及成品疫苗的质量控制具有重要意义。 抗原评价系统(含ELISA快速检测试剂盒)通常采用双抗夹心法，例如多克隆抗体(简称：多抗)—多抗、多抗—单克隆抗体(简称：单抗)、单抗—多抗、单抗—单抗的形式，多抗的使用，通常容易引起不同型别肠道病毒之间的交叉结合，对病毒的检测特异性不强；单抗的使用容易出现抗原表位结合能力不足，不能够客观反映抗原真实含量。 目前没有文献报道一种能够主要检测CA10空心病毒颗粒的抗原评价系统。现有的工艺研究中确定病毒液中空心和实心病毒的比例主要是依靠电镜观察的方式，电镜观察的方法对样品的浓度和缓冲体系的成分要求比较高，试验耗时长，对实验室的仪器设备要求比较高，具有一定的局限性。 发明内容 为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案： 第一方面，本发明提供一种针对CA10病毒的单克隆抗体，所述单克隆抗体具有SEQID NO:5所示的重链互补决定区CDR1、SEQ ID NO:6所示的重链互补决定区CDR2、SEQ IDNO:7所示的重链互补决定区CDR3，以及SEQ ID NO:13所示的轻链互补决定区CDR1、SEQ IDNO:14所示的轻链互补决定区CDR2、SEQ ID NO:15所示的轻链互补决定区CDR3；优选地，所述单克隆抗体具有SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的重链；和/或，优选地，所述单克隆抗体具有SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列的轻链； 优选地，所述CA10病毒为CA10空心病毒。 第二方面，本发明提供一种编码所述针对CA10病毒的单克隆抗体的多核苷酸序列，所述多核苷酸序列具有SEQ ID NO:1所示的编码重链互补决定区CDR1的序列、SEQ IDNO:2所示的编码重链互补决定区CDR2的序列、SEQ ID NO:3所示的编码重链互补决定区CDR3的序列，以及SEQ ID NO:9所示的编码轻链互补决定区CDR1的序列、SEQ ID NO:10所示的编码轻链互补决定区CDR2的序列、SEQ ID NO:11所示的编码轻链互补决定区CDR3的序列；优选地，所述多核苷酸序列具有SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列；和/或，优选地，所述多核苷酸序列具有SEQ ID NO:12所示的核苷酸序列； 优选地，所述CA10病毒为CA10空心病毒。 第三方面，本发明提供一种用于检测CA10病毒的试剂盒，所述试剂盒包括所述的单克隆抗体或所述的多核苷酸序列