一类星孢菌素类衍生物及其制备方法和应用发明专利3.docxVIP

一类星孢菌素类衍生物及其制备方法和应用 本申请是“一类星孢菌素类衍生物及其制备方法和应用”的分案申请，原申请的申请日为2019年9月19日，原申请的申请号为201910887005.3。 技术领域 本发明涉及放线菌发酵产物制备活性化合物领域，具体涉及一类星孢菌素类衍生物及其制备方法和应用。 背景技术 恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病，随着我国人口老龄化逐渐加剧、工业化和城镇化进程的加快、不健康生活方式及环境等危险因素的累积，恶性肿瘤的防控形势异常严峻。 2019年1月国家癌症中心发布的癌症统计数据显示恶性肿瘤死亡占居民全部死因的23.91％，且近十几年来恶性肿瘤的发病死亡均呈持续上升态势。肺癌、肝癌、上消化系统肿瘤及结直肠癌、男性前列腺癌、女性乳腺癌等依然是我国主要的恶性肿瘤。 目前我国恶性肿瘤的5年相对生存率约为40.5％，与10年前相比提高了约10个百分点，但与发达国家还有很大差距。手术、放疗、化疗和分子靶向药物依然是治疗癌症的几大主要手段，因此，发现更高效的抗肿瘤药物是降低恶性肿瘤死亡率最有效的办法。 星孢菌素(Staurosporine，STA)最早发现于1977年，是一种广谱的激酶抑制剂，特别是对蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)有强效抑制作用(IC?50＝1～20nM)，因此被广泛用于研究PKC在各类细胞信号传导过程中所起的作用。但STA为非选择性激酶抑制剂，限制了其作为临床药物使用。 多个STA衍生物包括天然来源的UCN-01、结构修饰得到的enzastaurin、edotecarin、CEP-2563、CEP-1347等进入临床研究或完成临床研究。衍生物lestaurtinib于2006年由FDA批准作为治疗急性髓细胞白血病的孤儿药；半合成衍生物midostaurin为一多靶点激酶抑制剂，于2017年由FDA批准用于治疗急性髓系白血病以及系统性细胞增生肥大症。这表明星孢菌素结构母核为一极具开发前景的化合物母核。 然而这些化合物通常选择性较差，对癌细胞及正常细胞均有抑制作用。因此寻找更多的结构新颖、选择性较高的星孢菌素类衍生物是发现具有抗肿瘤作用化合物的有效途径。 公开号为CN 107569491 A的专利说明书公开了一种星孢菌素类化合物的应用，通过对放线菌进行研究，分离纯化得到5种星孢菌素类化合物，所得星孢菌素类化合物对前列腺癌细胞具有较高的活性，同时还对Brd4蛋白具有较高的抑制作用，可用于制备治疗癌症、炎症或艾滋病的药物和Brd4蛋白抑制剂。 发明内容 针对本领域存在的不足之处，本发明提供了一类星孢菌素类衍生物，由放线菌通过固体发酵而得，具有明显的抗肿瘤活性及蛋白激酶抑制活性，可用于开发预防及治疗恶性肿瘤及激酶表达异常相关疾病的药物。 一类星孢菌素类衍生物，结构式如下任一结构所示： 所述的星孢菌素类衍生物可由放线菌经固体发酵产生，并通过分离纯化得到，易于操作和实施。 本发明还提供了所述的星孢菌素类衍生物的制备方法，包括步骤： (1)将放线菌接种于高氏一号培养基中，摇床培养，获得种子液； (2)将所得种子液接种于大米培养基中，静置培养，萃取获得发酵产物粗提物； (3)将所得发酵产物粗提物进行分离纯化，获得所述的星孢菌素类衍生物。 步骤(1)中，所述的放线菌可采用市售产品，如中国工业微生物菌种保藏管理中心出售的链霉菌Streptomyces sp.CICC 11031，订购网址：/。 作为优选，步骤(1)中，所述摇床培养的条件为：28℃，180rpm培养4～6天。 作为优选，步骤(2)中，所述大米培养基由大米和海盐水配制而成，大米质量和海盐水的体积之比为40g：60mL，即按照大米质量40g和海盐水体积60mL配比后经高压湿热灭菌所得； 所述种子液接种量为：每40g大米接种10mL种子液； 所述静置培养的条件为：28℃，静置培养70天。 作为优选，所述海盐水质量浓度为25‰。 作为优选，步骤(3)中，所述的分离纯化方法包括：萃取、凝胶柱色谱、中压制备色谱、硅胶柱色谱以及高效制备液相色谱。 作为优选，所述萃取条件：乙酸乙酯溶剂浸泡3天； 所述凝胶柱色谱条件：采用的填料为羟丙基葡聚糖凝胶(LH-20)，采用的洗脱剂为甲醇-水溶液，按照甲醇体积百分数为20％、40％、60％、80％、100％的比例洗脱； 所述中压制备色谱条件：填料为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为体积百分数40％～100％的甲醇+0.05％TFA(三氟乙酸)-水溶液梯度洗脱； 所述硅胶柱色谱条件：采用300～400目的精制硅胶，洗脱剂为二氯甲烷-甲醇溶液，洗脱体系为二氯甲烷:甲醇＝100:1，80:1，60:1，40:1，20:1，10:1，1:0； 所述高效制备液相色谱条件：采用的填料为十八烷基硅烷键合硅胶，采用的流动相是甲醇-水