低温诱导植物细胞染色体数目加倍.pdfVIP

. 低温诱导植物细胞染色体数目加倍 一、 实验目的 1．了解人工诱导植物多倍体的原理、方法及其在植物育种中的作用。 2 ．应用植物染色体制片技术，鉴别诱导后染色体数目变化。 3．学会探究性实验的设计方法。 二、 实验原理 通过低温阻碍细胞内酶促反映的进行， 从而导致细胞分裂时形成纺锤体所需 ATP 的供应 途径受阻，使细胞分裂过程中完成染色体加倍而细胞不能分裂，达到染色体数目加倍。 从理论上讲，观察染色体数目的最佳时期是分列中期，可当纺锤体的行成受到抑制时， 细胞分裂就停止在了前期，不再出现中期、后期，只有当细胞分裂进入到第二周期的中期时， 才能确保低温诱导染色体数目变化的成功。因此，低温处理的时间至少要有一个半周期的时 间。低温抑制了纺锤体的形成，同时也降低了酶的活性，细胞分裂的速度减慢，细胞周期会 延长。 三、 实验仪器与试剂 1. 材料：蚕豆 2.试剂：秋水仙素 3.仪器：超低温冰箱 四、实验步骤与方法 （1） 培养根尖 蚕豆种子于 30 ℃ ～ 40 ℃水浴中浸种 3 ～ 4h 后，取出放入带有湿 润纱布的培养皿中于 10 ℃ 培养，每 2d 换一次水。注意水要浸过蚕豆种子体积的 1/3 。 (2) 低温诱导处理 待实验材料长出约 1cm 左右根时，将实验材料平均分两组 : 实验组于 2 ℃的冰箱中进行低温诱导培养 36h 后( 换水时注意用 2 ℃的水，减小实验的误差 ) ，于 15 ℃ ～20 ℃恢复常温培养 10 ～ 12h( 即小于实验材料一个细胞周期的时间 ) 。对照组于 15 ℃ ～ 20 ℃ 常温进行培养，注意经常换水。 (3) 取材、固定、解离、漂洗与染色 常规“植物细胞有丝分裂”制片方法［ 1］。 (4) 显微观察与数据统计分析 随机观察并统计 10 个视野中分裂期和非分裂期细胞，计算 分裂指数 ( mitotic index ，MI) 。细胞分裂指数 = 分裂期细胞数 / 全部细胞数 ×100% 。统 计数据进行卡方检验。 可编辑 . 五、 实验记录 ( 1) 培养根尖 蚕豆种子于 30 ℃ ～ 40 ℃水浴中浸种 3 ～ 4h 后，取出放入带有湿润 纱布的培养皿中于 10 ℃ 培养，每 2d 换一次水。注意水要浸过蚕豆种子体积的 1/3 。 (2) 低温诱导处理 待实验材料长出约 1cm 左右根时，将实验材料平均分两组 : 实验组于 2 ℃的冰箱中进行低温诱导培养 36h 后( 换水时注意用 2 ℃的水，减小实验的误差 ) ，于 15 ℃ ～20 ℃恢复常温培养 10 ～ 12h( 即小于实验材料一个细胞周期的时间 ) 。对照组于 15 ℃ ～ 20 ℃ 常温进行培养，注意经常换水。 3.取材：待蚕豆根尖长至 2cm 时取其根尖顶端（ 0.5-1cm ） 4.预处理 :将取下的根尖置于盛有对二氯笨饱和水溶液的青霉素瓶中，浸泡处理 3-4 h 。 5. 固定：经过预处理的根尖，用水清洗，用甲醛 - 冰醋酸（ 3 ：1）固定溶液固定 6-24h, 固定材料可转入 70% 酒精中，于 4 ℃冰箱中保存备用。 6.解离：倒去固定液，用蒸馏水漂洗 2-3 次。