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同位素分析技术会计学第2页/共137页 例题 测定152.6mg蛋百质水解液中甘氨酸的含量。为此，将比活度为96.2cpm/mg的5.07mg14C-甘氨酸加到水解液，混均后分离出部分纯的甘氨酸，测得其比活度51.3cpm/mg。 则  第3页/共137页 2.反向同位素稀释(inverse isotope dilution analysis) 又称逆稀释，用于测定射性物质，分析公式： 则，第4页/共137页 例题 测定小球藻14CO2光合作用生成的14C-蛋白质中谷氨酸的含量。为此，取适量14C-蛋白质水解，从中分离出部分纯的谷氨酸，测得其比活度为254dpm/mg.在同样试样的水解液中，加入10.7mg非标记谷氨酸，混合均匀后，分离出部分纯的谷氨酸，测得其比活度为191dpm/mg。 则第5页/共137页 3.亚化学计量稀释法(substiochiometry istope dilution analysis) 从稀释系统和示踪剂原液分离出等量的化合物，同时测量，则因有： 等量分离可利用，难溶化合物的溶解度一定，一定电量下电解质的析出量一定，吸附剂的饱和吸附量一定，不足萃取剂的饱和萃取量一定等性质。 第6页/共137页 4.改进的亚化学剂量法(improved substiochiometry istope dilution analysis) 1）定量示踪法 在分析样品时，同时取含待测物已知的标样，分别加入等量的标记物，则：第7页/共137页若 则 若用亚化学剂量法分离出等量待测物， 则 该法不必知道所加入标记物的量w0，从而避免由其因质量小不易准确测量产生的误差。第8页/共137页 2)平行稀释法 该法与上法类似，但当标记物的加入量不能忽略时，分析时，可取两份等量样品wx，分别加入不同量的标准待测物w1和w2，然后再加等量标记物，此时其量可忽略，因此： 若采用亚化学计量法分离，使 ， 有 则第9页/共137页 5. 在现代仪器尤其是质谱分析中，同位素稀释法常作为一种内标计量分析的手段。 举例 Max haldimann et al. Direct determination of yrinary iodine by inductively coupled plasma mass spectrometry using isotope dilution whih iodine-129.Clinical chemistry1998;44(4):817-824 碘是合成人体甲状腺激素所必需微量营养元素，甲状腺激素在为维持机体能量代谢，促进人体骨骼发育，脑发育和垂体的支持作用中具有重要的生理作用，在碘缺乏地区，推行加碘盐是预防碘缺乏疾病的国家行动，测定尿碘的浓度是指导补碘的基本依据，而129I同位素稀释ICP—MS是一种最准确的测定尿碘的方法。第10页/共137页 理论： 碘是单同位素元素，核素为127I，为此只能以其长寿命的放射性同位素129I作为内标。样品添加内标后，混合物中碘同位素核素的原子个数比，相应于ICP-MS测定的129I与127I的强度比值R，即 式中，n为碘的摩尔数，a为碘的同位素127或129的丰度，下角标s和u分别代表内标和尿样。第11页/共137页 重排上式，并假设 ，则尿样中未知 碘的摩尔数为 考虑到质谱过程可能发生同位素质量歧视效应，使得测定的R值带有系统偏差，应引入一系统校正因子f,该因子可由对确切知道同位素构成的标样测定而确定，即第12页/共137页 式中，Rtrue是标准中确切已知的同位素比值，而 Rexp是质谱实际测定的同位素比值。 最终，用ICP-MS测定尿碘的同位素稀释计量关系式为第13页/共137页 §5.2 体外放射分析(in vitiro radioassay) 在体外条件下，以放射性标记的配体为示踪剂，以竞争或非竞争性免疫结合为基础，以放射性检测为定量手段的超微量物质分析技术。 竞争 放射免疫分析 抗体--抗源 非竞争 免疫放射分析类型 结合蛋白--激素 竞争性结合蛋分析 受体-- 配体 竞争性受体-体配体分析 第14页/共137页 第15页/共137页1.放射免疫分析(Radioimmunoassy,RIA) 建立在待测抗原物质对标记抗原与限量特异性抗体的结合竞争抑制基础上的将免疫学反应高度特异性与放射性测量高度灵敏性相结合的一种超微量分析方法。 特点：灵敏度高(10-9 —10-12g)，特异性强，重现性好，抗体可用免疫学方法根据需要制备。 第16页/共137页 1)基本概念 抗原(Antigen,Ag) 能刺激动物的免疫系统产生抗体(免疫原性) ，并与所产生的抗体能特异性结合(反应