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精品文档 病理科免疫组织化学技术员培训及技术操作规范 一、病理科免疫组织化学技术员培训规范： 凡新入我科的病理技术员均需进行免疫组化理论知识的学习、 培训， 经考核合格、 具备病理 技术员技士资质后方能从事免疫组织化学染色。 二、病理科免疫组织化学染色操作规范 1. 免疫组织化学染色前的准备事项 ( 一 ) 组织切片的制备 常规切片脱蜡至水（组织固定需用 10%中性甲醛） ( 二 ) 抗体的选择、稀释和保存 （1）选择抗体应先了解其反应谱和适用条件〔包括适用切片 ( 石蜡切片抑或冷冻切片 ) 、稀 释度和温育时间等〕。 （2 ）对于未曾使用过的新抗体，应按照有关说明书的提示，以几个不同的稀释度对适宜检 材( 已知阳性切片 / 涂片 ) 进行预试验 ; 根据染色阳性表达的程度和检材背景着色程度， 确定用 于染色的最适稀释度 （3 ）抗体的原液应于分装后置于一 20℃冷室中保存，切勿反复冻存 ( 以免效价 降低 ) 。 （4 ）抗体的工作液可置于 4℃冰箱中保存。 （5 ）抗体的稀释。 (1) 一般用 0.01M PBS( 生理盐水磷酸盐缓冲液 ) ，pH 值 7.2 。 (2) 或用 0.05M TBS( 生理盐水三经基氨基甲烷缓冲液 ) ，pH 值 7.6 。 (3) 必要时可按需要加适量小牛血清清蛋白。 ( 三 ) 被检测组织内抗原的修复 （1）经 4%中性甲醛之类含醛基固定剂固定的组织，其切片中的抗原决定簇因醛的交联作用 而被封闭， 从而影响抗原一抗体反应。 进行免疫组织化学染色前， 对于组织切片进行抗原修 复处理， 会使组织中的固有抗原尽量多地暴露出来， 提升了大部分检测抗体的阳性率和反应 强度。有的抗体不需要进行抗原修复。 应按抗体试剂说明书的提示决定是否进行被检测组织 内的抗原修复。 （2 ）抗原修复缓冲液。 (l) 一般为 0.01M 柠檬酸缓冲液 (2.1g 柠檬酸溶于 100ml 蒸馏水中，用 2M NaOH调节 pH值至 6.0) 。 精品文档 精品文档 (2) 有些抗体需要特殊修复缓冲液，如高 PH值的 EDTA(50mM Tris. ， 10mM EDTA，pH9.0) ， 或商品化的该高， 10mM EDTA，pH9.0) ，或商品化的该高 pH修复液等。 （3 ）抗原修复的常用方法。 (l) 胰蛋白酶消化法 : ①组织切片脱蜡、水化。 ②滴加一滴 0.1%胰蛋白酶液于组织切片上。 ③37℃下温育 20-40min( 温育时间取决于组织经 4%中性甲醛固定时间的长短和被检测 抗原 ) 。 ④蒸馏水冲洗，终止反应。 ⑤阻断内源性过氧化物酶。 ⑥进行免疫组织化学染色。（配制 0.1%胰蛋白酶液时，应将 0.1g 胰蛋白酶溶于 0.1% 无水氯化钙水溶液 (pH 值 7.8) 中。） （2) 胃蛋白酶消化法 : ①组织切片脱蜡、水化 . ②滴加胃蛋白酶工作液于组织切片上。 ③37℃下温育 10-30min( 一般为 10min，可延至 30min ，取决于组织经 4%中性甲醛固定 时间的长短 ). ④浸人蒸馏水，终止反应。 ⑤进行免疫组织化学染色。用 1%胰蛋白酶液 37℃下处理 20min 。( 应以 0.1M HCI 配制 胃蛋白酶工作液。过度的胃蛋白酶消化会使组织结构破坏、切片 脱落。 ) （3) 微波修复抗原法 : ①组织切片脱蜡、水化 ( 硅化玻片或经防脱片胶处理的玻片 ) 。