烟叶中总酚的测定.docVIP

烟叶中总酚的测定 实验原理 在碱性条件下，利用多酚的还原性，多酚可将磷钨钼酸还原成蓝色，蓝色深浅与多酚含量呈正相关，可借助分光光度计进行测定。 器材与仪器 仪器：分析天平、分光光度计、150ml三角瓶、水浴锅、100 ml容量瓶、30 ml刻度试管 1.福林试剂：称钨酸钠25克和磷钼酸5克，磷酸12.5ml，用水188ml一道回流煮沸2小冷 却后用水定容1升。 2.10%NaCO3溶液：用无水碳酸钠配制，冬季气温低时会析出碳酸钠结晶，可在温水浴上加热溶解后使用。 3.酚标准溶液：先配制成100 ml含儿茶酚100mg的溶液，再依次配制成100 ml中含儿茶酚0.5，1.0，1.5，2.0mg4种不同浓度的标准溶液（临用时再配）。 三、实验步骤 （1）待测液的制备 称取样品60-70mg左右,置于150ml三角瓶中，加入80℃热蒸馏水50 ml，在80℃以上水浴40min(不断摇动，使烟样不沾瓶壁)，取出冷却，过滤至100 ml容量瓶中定容，摇匀备用。 （2）取烘干的30 ml刻度试管两支，各准确移入上述待测液5ml，其中一支加5ml福林试剂，摇匀3 min后，加入10%碳酸钠5ml，振荡，以此为本底，两试管在室温下放置1h后呈蓝色，置分光光度计上，在700nm处测定，以本底溶液作参比，调节吸光度值为零。测出待测液的吸光度。 （3）绘制工作曲线：取5 ml不同浓度的酚标准液，各加5 ml福林试剂，置于30 ml刻度试管中摇匀3min后加入10％NaCO35 ml，振荡，同上步骤显色，用蒸馏水5ml代替标准液作空白对比，测出各标准溶液的吸光值，以系列标准酚浓度为横坐标，对应的吸光值为纵坐标，绘制工作曲线。 （四）结果计算 G*100 总酚（g/kg）= W 式中：G---根据测得吸光值查得酚值mg W—干样品质（mg） (五) 注意事项 提取酚类时，开始必须用80℃以上热水，以控制提取过程多酚氧化酶升高，避免酚类损失。