单线态和三线态.pptxVIP

会计学;2; 分子荧光分析法 一、基本原理 （一）荧光和磷光的产生 ? 从分子结构理论来讨论;4;5;6;7;8;9;10;外转移 指激发分子与溶剂分子或其它溶质分子 的相互作用及能量转移，使荧光或磷光强 度减弱甚至消失。这一现象称为“熄灭”或“猝灭”。 荧光与磷光的根本区别： ; (二 )荧光的激发光谱和发射光谱 激发光谱:(ex) 以不同波长的入射光激发荧光物质,在荧 光最强的波长处测量荧光强度 即以激发光波长为横坐标,以荧光强度为 纵坐标绘制曲线即可得到激发光谱曲线。 发射光谱：(em) 固定激发光波长（最大） 然后测定不同的波长时所发射的荧光强度 即可绘制荧光发射光谱曲线;在荧光的产生过程中，由于存在各种形 式的无辐射跃迁，损失能量，所以它们的 最大发射波长都向长波方向移动，以磷光 波长的移动最多，而且它的强度也相对较 弱。 ;14;15;（三）荧光的影响因素 分子产生荧光必须具备两个条件： ① 分子必须具有与所照射的辐射频率(紫外-可见光）相适应的结构（共轭双键），才能吸收激发光； ② 吸收了与其本身特征频率相同的能量之后，必须具有一定的荧光量子产率。 ;1.荧光效率 它表示物质发射荧光的能力，通常用下 式表示 ;2. 荧光与有机化合物结构的关系 （1）跃迁类型 实验证明，对于大多数荧光物质，首先经历????激发，然后经过振动弛豫或其他无辐射跃迁，再发生 ????跃迁而得到荧光。 （2）共轭效应 实验证明，容易实现????激发 的芳香族化合物 容易发生荧光，增加体系的共轭度荧光效率一般 也将增大，主要是由于增大荧光物质的摩尔吸光 系数，有利于产生更多的激发态分子;(3) 刚性平面结构 实验发现，多数具有刚性平面结构的 有机分子具有强烈的荧光。 因为这种结构可以减少分子的振动， 使分子与溶剂或其它溶质分子的相互作用 减少，也就减少了碰 撞去活的可能性。 ;20;3. 金属螯合物的荧光 大多数无机盐类金属离子，在溶液中只能 发生无辐射跃迁，因而不产生荧光。 不少有机化合物虽然具有共轭双键，但由 于不是刚性结构，分子处于非同一平面， 因而不发生荧光。 但是，若这些化合物和金属离子形成螯 合物，随着分子的刚性增强，平面结构的 增大，常会发生荧光;22;23;（四）溶液的荧光（或磷光）强度 1. 荧光强度与溶液浓度的关系 荧光强度If正比于吸收的光量Ia与荧光量 子产率? 。 If = ? Ia 式中?为荧光量子效率，又根据Beer定律 A=-lg I/ I0 I= I0 .10- A Ia = I0 - I = I0(1- 10 -A) I0和I分别是入射光强度和透射光强度。代入上式得 If = ? I0(1- 10 -kb c) ;整理得： If =2.3 ? I0 kbc 当入射光强度I0 和b一定时，上式为： If = K c 即荧光强度与荧光物质的浓度成之正比， 但这种线性关系只有在极稀的溶液中， 当 kbc?0.05时才成立。 对于较浓溶液，由于猝灭现象和自吸收等原因，使荧光强度和浓度不呈线性关系。 ;26;27;28;29;30;31;32;33;34;35;36;37;38;39;40;41;42;43;44;45;2、激发光和荧光波长的选择 准确移取10.0mg·L-1VB2标准溶液5.0 mL于50mL容量瓶中定容。转移部分溶液至石英比色皿中，将荧光分光光度计的荧光波长暂定在525 nm处，在200－500 nm波长范围内对激发波长进行扫描，记录激发光谱曲线，约在265、372、442nm有三个峰。然后将激发波长设定在442nm处，在400－700nm波长范围内对荧光波长扫描，记录荧光光谱曲线，约在525nm处荧光强度最大。从激发和发射光谱上确定最佳的激发和发射波长 ;3、标准系列溶液的配制 在五个干净的50mL容量瓶中，分别加入1.00 mL，2.00 mL，3.00 mL，4.00 mL和5.00 mL．定容至50mL。 4、标准溶液的测定 设置适当的仪器参数, 在最佳激发波长和发射波长处从稀到浓测量系列标准溶液的荧光强度。 5、未知试样的测定 取待测液5.0 mL置于50m