DNA重组技术学习资料.pptVIP

第四部分 ＤＮＡ重组技术;ＤＮＡ的酶切反应;一、实验目的;三、试剂与器材;;四. 操作步骤;;五.注意事项;;ＤＮＡ片段的胶回收;胶回收注意事项; ＤＮＡ的连接;;1、ＤＮＡ分子的体外连接;连接反应中值得注意的几个问题：;Ｔ４ＤＮＡ连接酶作用机制;2.连接反应的温度;3. ＤＮＡ的平末端和粘性末端;4.碱性磷酸酶处理质粒载体;5.连接反应的检测;实验试剂;实验方法;结果与分析;问题与讨论：;ＤＮＡ的转化及转化子的筛选;制备感受态细胞;重组子的筛选;１.抗生素筛选法;２.互补法;实验试剂;实验方法;二、转化 １．在１.５ml Eppendorf管中加入２００μl感受态细胞和１０μl ＤＮＡ （４０ng）溶液， 温和混匀，于冰上３０分钟。 ２．于４２℃水浴９０秒。 ３．冰浴２分钟。 ４．加入８００μl LB液体培养基 　　　３７℃４５分钟。 ５．取２００μl涂布于含Amp(５０μg/ml)琼脂糖平皿，３７℃培养１２～１６小时，观察结果。; ;结果与分析;问题与讨论：