病毒感染细胞筛选.docVIP

10cm培养皿内的细胞待长满后传代，首先每种稳定细胞系冻存4-5支细胞，待基因敲低鉴定清楚后，解冻 冻存细胞，进行表型观察分析。通常情况下，由于慢病毒为复制缺陷型病毒，受感染的细胞不能产生新的病毒，因此从参加病毒颗粒开始，经过5-6次换液后，培养基内已不存在病毒颗粒，可以移至普通细胞培养室内培养研究。?? 二??G418? (一)?确定最优筛选浓度? 由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的相同浓度的G418的活性不尽相同，所以在筛选之前，一定要确定G418的最正确筛选浓度。? 1.?G418的配制：?取1g?G418溶于1ml??1mol/L的HEPES液，加蒸馏水定容至10ml〔使G418终浓度为 0.1g/ml?,HEPES终浓度为100mmol/L〕，过滤消毒，4度保存。? HEPES的化学全称为羟乙基呱嗪乙硫磺酸〔N’-a-hydroxythylpiperazine-N’-?ethanesulfanic?acid?〕，分子量238.31，是一种氢离子缓冲剂，能较长时间的控制溶液的pH处于恒定的范围，而对细胞无毒性作用。? 1mol/L?HEPES的简单配置：HEPES?23．83g，溶解于80ml的双蒸水中，用10mol/L的NaOH调节pH至 wk_ad_begin({pid : 21});wk_ad_after(21, function(){$(.