丙型肝炎病毒核酸定量测定试剂盒说明书.docVIP

试剂 RT-PCR主反响液 酶混合液 荧光探针 用量〔ul〕 29 0.6 0.4 计算好各试剂使用量，参加一适当体积离心管中，充分混匀，简短离心，向设定的n个〔n=样本数+1管强阳性对照+1管临界阳性对照+1管阴性对照+4个校准品〕PCR反响管中分别参加30ul，转移至样本处理区。 3. 加样〔样本处理区〕 在PCR反响管中分别参加步骤2.9.中制备的RNA溶液及定量校准品〔1-4〕各10ul，盖紧管盖，简短离心，将反 应管放入荧光PCR检测仪中，记录样本摆放顺序。 4. RT-PCR反响〔检测区〕： 步骤 循环数 温度(℃) 反响时间(min:sec) 1 1 42 30:00 2 1 95 3:00 3 5 95 10 55 30 72 1:00 4 40 95 5 60 30 60℃ 【结果分析】 1. 结果分析条件设定: 使用 ABI PRISM 7000荧光PCR检测仪进行结果分析时基线〔baselinethreshold〕设定原那么以基线刚好超过阴性对照品扩增曲线的最高点，且Ct值=40为准。定量标准曲线的相关系数应达0.97以上。 2. 质控标准 2.1 本试剂盒的定量线性范围：103≤测定结果≤108IU/ml。 2.2 将校准品1-4的浓度输入，仪器自动以定量质控参考品的拷贝数的对数值为横坐标，以其实际测得的Ct值为纵坐标给出标准曲线，标准曲线的相关系数应≥0.