PALL颇尔-实验操作指南-3.除病毒过滤小试操作-Prime with protect.pdf

Protect+Prime 除病毒过滤小试操作 1. 实验设备 压力容器（C3EP1），调压阀，一次性三通阀，耐压管，天平，3MCFPRM 12，4MCFPRT 12 2. 实验试剂 纯化水，缓冲液，料液 3. 实验步骤 （1） 首先将Protect 和Prime 串联在一起，并且连接连接到三通阀上。 按照压缩空气→减压阀→压力罐→三通阀→Protect→Prime 的连接方式正确连 接，见下图。 （2） 纯水润洗滤膜，压力容器中至少60mL 纯水，将系统用水通过Luer 阀排空气泡 （3） 调节调压阀使得测试压力达到 2.1bar ，稳定后收集并记录滤出端时间与体积， 计算滤速，润洗时间至少 10min，正常滤速范围 1.4-2.6mL/min @20℃ ，考虑 温度效应进行修正。如果水滤速符合正常范围时，卸去压力进行下一步操作；如 水滤速不符合正常范围时，检查所有参数并重新测试。 （4） 缓慢调节调压阀进行卸压，卸压完成后，调节三通阀至旁通位置，将容器中残留 纯化水排空。 （5） 缓冲液平衡及滤速检测：在膜片上游加入20ml 缓冲液，将系统加压至2. 1bar ， 稳定后检测缓冲液在2.1bar 下的滤速（检测时间5min），并与水滤速进行比较。 检测完毕后卸去压力，排空上游缓冲液。注意整个过程不要将气泡引入Protect 及Prime 针头滤器中。 （6） 将料液（料液如有沉淀，预先0.2um 过滤）加入压力容器中，安装好上游气路。 直接调节压力到设定压力（注：通常选 2.1bar）开始过滤，下游出现第一滴料 液时开始计时，当滤出液达到预计体积，或达到设定过滤时间，或所加料液完全 滤出，或者当滤速降低到起始滤速的75％左右时，终止过滤。过滤期间，定时 计量滤出料液总质量，前30min 内每5 分钟计量 1 次，后期每 15 ~20 分钟记 录 1 次，并计算过滤速度。建议用天平（0.01g 级别）考察滤出液质量，根据密 度计算滤出液体积。 （7） 过滤结束后，卸压后打开上盖，将未滤出的料液倒出处理。用适量缓冲液/水将 料液筒简单冲洗后，再加入适量缓冲液/水，安装好上游气路，加压到 2.1bar ， 继续过滤并顺序收集滤出样品4 份，约3ml/份，分别记为Protect+Prime 冲洗 样品 1，2 ，3 ，4 。 （8） 过滤结束后，卸压后打开上盖，将缓冲液/水倒出，去除Pegasus Protect 滤器， 然后安装好上游气路，将系统加压至3.1bar （45psi）稳定5min 或至无液体流 出后，在60s 内观察出口是否有气泡产生，如无气泡表明Prime 系统完整。 4. 实验结果 滤膜类型 过滤时间 过滤体积 过滤通量 平均滤速 终压差 滤前浓度 滤后浓度 样品回收率 [min] [mL] [L/m2] [LMH] [bar] [mg/mL] [mg/mL] %