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植物生理学实验教案 实验指导书：候书林主编. 植物生理学实验指导.科学出版社，2004 实验一、植物组织渗透势测定-质壁分离法 实验二、植物组织水势测定-小液流法 实验三、叶绿体色素的提取与分离及理化性质鉴定 实验四、叶绿素a,b 含量测定 实验五、植物体内几种呼吸酶的测定 实验六、植物叶面积测定 实验七、植物根系对离子的选择性吸收 实验八、叶片光合速率的测定及光合仪的使用 实验九、种子活力的快速测定 实验十、植物组织可溶性糖含量的测定 实验十一、低温对植物的伤害 实验十二、丙二醛含量的测定 实验一、植物组织渗透势测定-质壁分离法 [原 理] 将植物组织置于对其无毒害的一系列不同浓度的溶液里处理一定时间，然后镜检发生质壁 分离的细胞数，通常视野中有 50％的细胞发生质壁分离时定为初始质壁分离，细胞初始质壁 分离时压力势为零，因而可把引起细胞初始质壁分离的外界溶液称之为等渗溶液，其溶液具有 的渗透势即为细胞的渗透势。由于很难正好找到引起 50％细胞发生质壁分离的浓度。因此通 常用插值法求得等渗溶液浓度，代入公式即可计算渗透势。 [器材与试剂] 器材：显微镜，载玻片，盖玻片，镊子，刀片，培养皿(或具塞试管)，记号笔，滴管。 试剂：蔗糖。 [方法与步骤] 1. 配制 0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7mol 蔗糖/L 水的质量摩尔浓度，贮6 个试剂瓶中， 必要时配制溶液浓度的相差可≤0.05mol蔗糖/L 水。 2. 取 6 套干净清洁的小培养皿，用记号笔编号，将配制好的不同浓度的蔗糖溶液按顺序 倒入各个培养皿中使成一薄层，盖好皿盖。 3. 将带有色素的植物组织或叶片(可选用有色素的洋葱鳞片的外表皮，紫鸭跖草，蚕豆， 小麦，玉米等叶的表皮)撕取表皮迅速分别投入各种浓度的蔗糖溶液中，每个培养皿中放材料 3 个左右，使其完全浸没，浸泡 20-40 分钟。 4. 到时后，取出表皮，放在载玻片上，滴一滴相同浓度的蔗糖，盖上盖玻片，在显微镜 下观察质壁分离的细胞数和细胞总数，直接或间接(插值法)地找出引起 50％细胞发生质壁分 离的外界溶液浓度，即为细胞渗透浓度值。 插值法求细胞渗透浓度的公式为： 式中 O 为细胞的渗透浓度，mg 为引起 p 质壁分离的浓度 m 为引起 P 质壁分离的浓度，P g 1 1 2 2 1 为由 m 溶液引起质壁分离百分数，p 为由 m 溶液引起质壁分离的百分数。 1 2 2 求得 O 按下式计算渗透势 g ψ =-iRTO π g ψ 为细胞渗透势(bar)；R 为气体常数(0.083bar L/mol·K)；T 为绝对温度(273+t℃)； π 等渗系数，蔗糖为 1。 【思考题】 1．配制蔗糖溶液时为何用质量摩尔浓度（mol/kg H2O）而不用容积摩尔浓度mol/L？ 2．某植物叶片吸水饱和时的渗透势经测定为 -0.8MPa，又用质壁分离法测出其渗透势为 -0.9MPa，请计算质壁分离状态的细胞液体积相当于饱和时的百分数。 实验二 植物组织水势的测定（小液流法） 一、 原理 将植物组织分别放在一系列浓度递增的溶液中，当找到某一浓度的溶液与植 物组织之间水分保持动态平衡时，则可认为此植物组织的水势等于该溶液的水势。因 溶液的浓度是已知的，可以根据公式算出其渗透压，取其负值，为溶液的渗透势（ψπ ）， 即代表植物的水势（ψ ）（waterpotential）。 ψ ＝ψπ ＝－P＝－CRT （大气压） 二、材料、仪器设备及试剂 （一）材料：小白菜、菠菜、油菜或其它作物叶片 （二）仪器设备：1.带塞青霉素小瓶12个；2.带有橡皮管的注射针头；3. 镊子；4.打孔器5.培养皿。 （三）试剂：1.0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30mol/L蔗糖溶液；2. 甲烯蓝粉末。 三、实验步骤 （一）取干燥洁净的青霉素瓶6个为甲组，各瓶中分别加入0.05～0.30mol/L 蔗