表面等离子共振技术.pptxVIP

表面等离子共振技术发展简史第1页/共75页1902年，Wood在光学实验中发现SPR现象1941年，Fano解释了SPR现象1971年，Kretschmann为SPR传感器结构奠定了基础1983年，Liedberg将SPR用于IgG与其抗原的反应测定1987年，Knoll等人开始SPR成像研究1990年，Biacore AB公司开发出首台商品化SPR仪器SPR用途简介第2页/共75页实时分析，简便快捷地监测DNA与蛋白质之间、蛋白质分子之间以及药物—蛋白质、核酸—核酸、抗原—抗体、受体—配体等等生物分子之间的相互作用，在生命科学、医疗检测、药物筛选、食品检测、环境监测、毒品检测、法医鉴定等领域具有广泛的应用需求。表面等离子共振原理第3页/共75页1. 消逝波2. 等离子波3. SPR的光学原理1.消逝波第4页/共75页n1 sinθ1 = n2 sinθ2菲涅尔定理：当光从光密介质入射到光疏介质时（n1n2）就会有全反射现象的产生。密疏密疏1.消逝波第5页/共75页密界面疏这表示沿X轴方向传播而振幅衰减的一个波，这就是消逝波。全反射的光波会透过光疏介质约为光波波长的一个深度，再沿界面流动约半个波长再返回光密介质。光的总能量没有发生改变。透入光疏介质的光波成为消逝波。 2.等离子波第6页/共75页 等离子体 等离子体通常是指由密度相当高的自由正、负电荷组成的气体，其中正、负带电粒子数目几乎相等。 金属表面等离子波 把金属的价电子看成是均匀正电荷背景下运动的电子气体，这实际上也是一种等离子体。由于电磁振荡形成了等离子波。3.SPR光学原理第7页/共75页3.SPR光学原理第8页/共75页我们在前面提到光在棱镜与金属膜表面上发生全反射现象时，会形成消逝波进入到光疏介质中，而在介质（假设为金属介质）中又存在一定的等离子波。当两波相遇时可能会发生共振。3.SPR光学原理第9页/共75页当消逝波与表面等离子波发生共振时，检测到的反射光强会大幅度地减弱。能量从光子转移到表面等离子，入射光的大部分能量被表面等离子波吸收，使得反射光的能量急剧减少。3.SPR光学原理第10页/共75页可以从反射光强的响应曲线看到一个最小的尖峰，此时对应的入射光波长为共振波长，对应的入射角为SPR角。SPR角随金表面折射率变化而变化，而折射率的变化又与金表面结合的分子质量成正比。这就是SPR对物质结合检测的基本原理。SPR的响应模式第11页/共75页n1 sinθ1 = n2 sinθ2因为 sinθ2 = 1 所以 sinθ1 = n2/n1SPR的检测模式直接检测：适用于大分子（1000 Da）SPR的检测模式第13页/共75页 抑制模式： 将待测小分子固定在传感器表面，在样品中加入过量对应大分子。第14页/共75页SPR仪的结构及工作原理朱倩iacore Control第15页/共75页Biacore 3000工作仪器第16页/共75页Biacore 3000工作仪器核心部件： 传感器芯片 液体处理系统 光学系统其他： LED状态指示器 温度控制系统Biacore 3000核心部件第17页/共75页Biacore 3000的光学系统第18页/共75页第19页/共75页Biacore 3000传感器基本结构光波导耦合器件金属膜分子敏感膜第20页/共75页传感芯片——光波导耦合器件第21页/共75页Krestschmann棱镜型光纤在线传输式光栅型光纤终端反射式Otto棱镜型金属膜分子敏感膜棱镜型装置工作原理第22页/共75页(a) Otto 型(b) Kretschmann 型光纤型光波导耦合器第23页/共75页在线传输式SPR 光纤传感器光纤型光波导耦合器第24页/共75页终端反射式SPR 光纤传感器光栅型光波导耦合器第25页/共75页第26页/共75页光源He2Ne激光器LED白炽灯——卤钨灯第27页/共75页传感芯片——金属膜反射率高化学稳定性好厚度合适金属材料的选择第28页/共75页1、可见光范围内反射率较高：Ag、Al 、Au 、Cu 2、化学稳定性好Ag、Al、Au、CuAg、Au第29页/共75页Ag膜、Au膜的比较　金膜(实线) 和银膜(虚线) SPR 光谱理论值恒定波长, 反射系数与入射角度关系波长: 1 和2 为750nm,3 为600nm, 4 为500nm恒定入射角度, 反射系数与波长关系入射角度: 1 为80ü, 2 为70ü,3 为72ü, 4 为6815ü,5 为6515ü　金属膜厚度对SPR 谱的影响第30页/共75页λ= 63218nm介质为水( n = 1.333) 棱镜折射率为50nm第31页/共75页传感芯片——分子敏感膜成膜方法：金属膜直接吸附法共价连接法（生物素-亲和素、葡聚糖凝胶、水凝胶、高