生化-年研究生实验2 PCR检测apoB基因多态性.pptVIP

Mg2+ (1)TaqDNA聚合酶作用时需要Mg2+ (2)不同的酶需不同Mg2+ (3) Taq：Mg2+ 对反应影响很大，1-3 mM终浓度 外界影响： (1) EDTA鳌合Mg2+ 选较低浓度TE(10mM Tris,1mM EDTA)； (2) DNA模板、引物和dNTP 的磷酸基团均可与Mg2+ 结合， 降低Mg2+有效浓度 如果扩增产物或效率不理想，要注意调整Mg2+浓度 （三） PCR反应条件 PCR循环的温度和时间（变性、退火、延伸） PCR循环的次数和平台效应 （1）变性温度：94-95℃ Templete：GC比例高、长度很长，则变性时间↑ （2）退火：温度越高，扩增特异性越好 取决于引物Tm值：Tm值=4(G+C) ＋2(A+T) ； 复性温度=Tm值-(5～10℃) ，一般在45～55℃ ； Tm↑退火T↑，Tm↓退火T↓ ； 若Tm较高，可使退火和延伸在同一温度 （3) 延伸：72 ℃ 1min/kb（10kb内） 一般：40－60sec 温度和时间 平台效应 PCR的三个反应步骤反