琼脂糖凝胶电泳5.pptxVIP

琼脂糖凝胶电泳5;一、实验目的 掌握琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和方法 ;琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，主要是利用分子筛效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关系。因而就可依据DNA分子的大小使其分离。该过程可以通过把分子量标准参照物和样品一起进行电泳而得到检测。;三、实验材料、器具及药品 以前实验中提取的小麦总DNA和质粒样品。 电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。 琼脂糖，1XTAE电泳缓冲液，溴化乙锭（EB），10X载样缓冲液 ;⑵ 用胶带将制胶板两端封好，插入适当梳子，将溶解的琼脂糖（约50℃）倒入，室温冷却凝固。;⑺ 将染色后的凝胶置于紫外透射检测仪上，盖上防护观察罩，打开紫外灯，可见到发出荧光的DNA条带。;植物总（核）DNA样品应呈现一条迁移率很小的整齐条带。;（1）琼脂糖含液体量大，可达98-99%，近似自由电泳，但是样品的扩散度比自由电泳小。 （2）电泳速度快。 （3）透明而不吸收紫外线，可以直接用紫外检测仪作定量测定。 （4）样品易回收，常用于制备。;配制多大浓度的琼脂糖凝胶，要根据被检的DNA分子大小来确定。 ;常用的电泳缓冲液; Ⅰ 0.25%溴酚蓝 ，0.25%二甲苯青 ，40%蔗糖水溶液 Ⅱ 0.25%溴酚蓝 ，0.25%二甲苯青 ，30%甘油水溶液;第11页/共14页;第12页/共14页; ;感谢您的观看！