聚合酶链式反应演示文稿.pptVIP

Sequence analysis：是检测PCR产物特异性的 最可靠方法。 当前30页，共63页，星期日。 DNA测序 1.Sanger法（双脱氧末端终止法） 用4种2′,3′―双脱氧核苷酸（ddNTP）代替部分脱氧核苷酸（dNTP）作为底物进行DNA合成反应，从而获得在不同部位终止反应的大小不同的DNA链，经高分辨率变性聚丙烯凝胶电泳分离，就可以对DNA序列进行分析 当前31页，共63页，星期日。 当前32页，共63页，星期日。 Sanger法测定DNA序列 当前33页，共63页，星期日。 当前34页，共63页，星期日。 2.DNA自动化测序 方法要点 ● 基于Sanger法的基本原理 ● 用标记荧光染料的ddNTP ● 经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离 ● 用荧光检测仪检测信号经计算机分析 ● 得到DNA分子序列 当前35页，共63页，星期日。 DNA自动测序结果举例 当前36页，共63页，星期日。 PCR METHODS STANDARD PCR HOT START PCR RT PCR IN SITU PCR PCR-ELISA REAL TIME QUANTITATIVE PCR 当前37页，共63页，星期日。 HOT START PCR In hot-sta