细胞工程花药和花粉培养.pptVIP

染色体加倍 （一）茎段培养 将单倍体植株的茎段进行培养，诱导愈伤组织形成。由于单倍体愈伤组织在培养过程中会有一定频率的 核内有丝分裂，从而形成二倍体细胞，分化出纯合的二倍体植株。 （二）化学试剂诱变 有秋水仙素、Oryzalin、trifluralin、APM等。 1、秋水仙素诱导 （1）浸泡法 无菌条件下以一定浓度的秋水仙素浸泡再生小植株，再转移至新鲜培养基中培养。 （2）生长锥处理 秋水仙素水溶液直接涂抹生长点（顶芽或腋芽）。 （3）培养基处理 将单倍体植株和任何一部分作为外植体，种植在附加一定浓度和秋水仙素的培养基中培养一段时间后，转入无秋水仙 素的相同培养基中继续培养诱导胚状体。 2、除草剂诱导 （毒性小，引起植株的变异几率小） 当前27页，共43页，星期日。 当前28页，共43页，星期日。 当前29页，共43页，星期日。 水稻花药栽培 当前30页，共43页，星期日。 水稻花药栽培 当前31页，共43页，星期日。 第7章 花药和花粉培养 当前1页，共43页，星期日。 主要内容 7.1 花药培养 7.2 花粉培养 7.3 花药和花粉培养中的白化苗问题 7.4 操作实例 当前2页，共43页，星期日。 植物花药/花粉培养历史 ?Guha和Maheshwari （1964） 曼陀罗花药培养 Nitsch 和 Norreel (1973) 烟草花粉培养（游离小孢子培养） Chu（1973）小麦花粉培养 （早期花药培养主要依靠小孢子的自然胚胎发生产生单倍体，能自 发形成胚胎发生的基因频率较低，效率极低） 80年代后期到90年代期间，花培技术迅速发展。许多作物小孢子 培养已经成功。十字花科、麦类、水稻、玉米等。 90年代，一些先前被认为是不易进行小孢子培养的基因型也相续 成功Konzak (1999) 。 当前3页，共43页，星期日。 花粉和花药的区别 两者的异同点 1.培养目的相同，均获得小孢子植株。 2.花药培养属于器官培养；而花粉培养属于细胞培 3.花粉培养没有药壁组织干扰，可计数小孢子产胚率；能观察雄核发育的全过程，单倍体产量高。但技术更复杂。 当前4页，共43页，星期日。 花粉和花药的培养作用 1、作物育种 （1）缩短育种周期：常规育种需4-6年获得纯系，而小孢子培养仅需一年。 供体植株 小孢子（n） 花粉植 株（n） 加倍 纯合植株DH （2n） 花培 雄核发育 自然加倍 人工 一年内获得纯系 当前5页，共43页，星期日。 （2）提高了目标基因型的选择效率? 例子： 二倍体供体植株基因型为AaBb，若要从后代中选择基因为AAbb的纯合单株 常规方法： AAbb出现的概率为1/16，并且不能将AAbb 与Aabb区分开。 AB Ab aB ab AB AABB AABb AaBB AaBb Ab AABb AAbb AaBb Aabb aB AaBB AaBb aaBb aaBb ab AaBb Aabb aaBb aabb 当前6页，共43页，星期日。 （3）诱变育种中的作用 植株不受显隐性的影响，在诱变育种中能在当代及 时获得突变个体，加倍后成为稳定的纯系。? 当前7页，共43页，星期日。 花药离体培养的过程：? 当前8页，共43页，星期日。 7.1 花药培养 花药培养：是指把发育到一定阶段的花药接种在适宜培养基上，使其中的花粉发育成单倍体植株的过程。 花药培养过程的主要环节： 1、选取花粉单核期的花蕾和幼穗； 2、进行适当的预处理； 3、对外植体进行表面消毒； 4、无菌条件下取出花药接种到合适的培养基上，在适宜的条件下培养； 5、花粉胚或花粉愈伤组织发育到适宜阶段后，转入植株再生培养基形成花粉植株； 6、在试管苗阶段或移栽成活以后进行花粉植株的染色体加倍； 7、炼苗，移入土壤栽培。 当前9页，共43页，星期日。 一、材料的选择 花药外植体的选择是否合适，直接关系到培养能否功。 当前10页，共43页，星期日。 1.供体植株的基因型 材料的遗传背景对花药培养的影响很大，不同植物甚至不同品种之间对花药培养的反应都有差异，因此选择合适的品种常是培养能否成功的关键因素。如水稻中粳稻比籼稻容易培养。 当前11页，共43页，星期日。 2.供体植株的生理状态 供体植物生理对诱导频率有直接影响。如多年生植物中，幼年植物比老龄植物的花药诱导频率高；草本植物中生长健壮的花药诱导频率较高；烟草开花早期的花药比后期的更容易产生花粉植株；供体植株的生长条件对花粉发育及其对离体培养的反应也有重要影响。 当前12页，共43页，星期日。 3.花粉的发育时期 不同植物的花粉对离体培养有其特定的最敏感发育时期，因此，选择发育到合适时期的花粉是提高花粉植株诱导