血清总胆汁酸循环酶法测定法.docVIP

血清总胆汁酸循环酶法测定法 1. 实验原理 胆汁酸会被3?-羟甾醇脱氢〔3?-HSD〕以及?-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型〔Thio-NAD〕特异性地氧化，生成3-酮类固醇以及?-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸复原型〔Thio-NADH〕。此外生成的3-酮类固醇在3?-羟甾醇脱氢〔3?-HSD〕及?-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸复原型〔Thio-NADH〕存在下，生成胆汁酸及?-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型〔Thio-NAD〕。如上所述，依据循环酶而放大微量的胆汁酸量，测定单位时间内生成的?-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸复原型〔Thio-NADH〕在405nm处的吸光度变化，以求得胆汁酸的浓度。 2. 标本： 2.1 病人准备：标本以空腹血清为宜，餐后胆汁酸会升高，应注意采血时间。 2.2类型：血清、肝素或EDTA处理的血浆。应使用新鲜标本。标本必须避光保存。 3. 标本存放 4℃保存可稳定7天，-20℃保存可稳定3个月。 4. 标本运输 常温条件下避光保存运输。 5. 标本拒收标准 细菌污染的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂 南京波因特总胆汁酸测定试剂盒〔试剂1：2×60ml 试剂2：2×20ml〕 6.1.1 试剂组成 试剂1〔R1〕： β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD) 2mmol/L Tris缓冲液